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超声破坏Sono Vue微泡介导Ang-1基因的体外、体内转染

王潇  郭瑞强  周青  陈茜  陈金玲  
【摘要】:目的探讨超声破坏微泡造影剂在体外及体内介导基因转染的效率及其促血管新生的作用。方法 293T细胞悬液分为3组:A组(对照组,每孔仅加入目的基因质粒),B组(单纯超声照射+质粒组)及C组(微泡+超声+质粒组),超声辐照条件为连续波,声强1.5 W/cm~2,照射时间为30 s;转染后48 h用荧光显微镜和流式细胞仪分别定性、定量观察基因的转染效率;27只健康成年中国家兔行急性前壁心肌梗死造模后随机分为3组:对照组(单纯静脉注射质粒组,P组)、超声辐照+质粒组(U+P组)、超声辐照+微泡+质粒组(U+M+P组);于基因转染前后分别行心肌声学造影(MCE)检查,并于处死后取心肌组织行PCR及Western blot检测Ang-1 mRNA及其蛋白的表达,心肌组织Ⅷ因子染色检测其新生毛细血管密度。结果 48 h后可在荧光显微镜下观察到转染成功的细胞胞浆内发出绿色荧光,其中A组未见明显绿色荧光表达,C组的绿色荧光表达量明显高于B组;流式细胞仪检测A组未见明显荧光表达,C组转染效率较B组显著提高(P0.01);体内转染中,心肌声学造影可见U+M+P组转染前充盈缺损处出现片状造影剂回声,PCR可检测出Ang-1 mRNA表达,Westernblot可检测出目的基因的蛋白产物,余各组则无明显造影剂充填,RT-PCR、Western blot均无法检测出Ang-1基因及其蛋白的表达;心肌组织Ⅷ因子染色后高倍镜下计数显示U+M+P组可见大量新生毛细血管,余各组未见明显新生毛细血管。结论超声破坏微泡造影剂可明显提高体外及体内的基因转染效率,并且具有良好的促血管新生作用。

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