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携抗ICAM-1抗体的Sono Vue微泡造影剂靶向识别受损内皮的实验研究

陈茜  周青  汪迎晖  王潇  郭瑞强  
【摘要】:目的探讨携抗ICAM-1抗体的靶向微泡的制备方法,以及靶向微泡在体内和体外的寻靶作用。方法选用标记了FITC的抗ICAM-1作为一抗。Sono Vue微泡造影剂与稀释后的抗ICAM-1抗体以2:1的体积混和,分别调整反应液pH值至4.0~5.0或pH值至8.0~9.0,静置分层,取上浮泡沫,重悬于PBS缓冲液中制成携抗ICAM-1的微泡超声造影剂。将微泡混悬液置于荧光显微镜下观察。人血管内皮细胞株(ECV 304)经100 U/ml IL-1β刺激大量表达ICAM-1。将200μl携抗ICAM-1抗体微泡与刺激后或未经刺激的ECV 304细胞混合,荧光显微镜下观察细胞与微泡的结合情况。结扎冠状动脉左旋支制备兔心肌梗死模型。将1 ml携抗ICAM-1抗体的微泡或FITC标记的微泡经耳缘静脉注入兔循环系统,造影后取材,将梗死区心肌组织进行冷冻切片,显微镜下观察内膜层微泡数量及荧光现象。结果在pH值为4.0~5.0的酸性条件下,抗ICAM-1抗体可与SonoVue微泡结合,光镜下可见结合了抗ICAM-1抗体的微泡部分聚集,荧光显微镜下可见微泡外周发出绿色荧光。流式细胞检测在pH值为4.0~5.0的酸性条件下抗体与微泡的结合率为(52.3±5.3)%,而在pH值为8.0~9.0的碱性条件下抗体与微泡的结合率仅为(2.7±0.8)%。携抗ICAM-1抗体的靶向微泡可在体外黏附于经IL-1β刺激的ECV 304细胞表面。兔梗死心肌组织的冰冻切片在荧光显微镜下观察可见受损血管内膜层有明亮荧光表达。结论携抗ICAM-1抗体的微泡能够在受损内皮处高浓度滞留,有利于超声造影的观察,更为微泡携带的药物或基因在局部定向的释放开辟了良好前景。

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