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超声微泡联合Ad-EGFP/HIF-1α介导EPCs归巢大鼠缺血心肌的实验研究

冉海涛  李巧  王志刚  钟世根  凌智瑜  李攀  李兴升  陈庆伟  
【摘要】:目的研究超声破坏微泡联合Ad-EGFP/HIF-1α介导EPCs移植归巢大鼠缺血心肌的可行性及有效性。方法采用Percoll密度梯度离心法分离SD大鼠骨髓MNCs,VEGF、bFGF及EGF诱导培养;Ad-EGFP/HIF-1α在HNK293细胞中进行扩增,之后感染体外培养的EPCs。将30只SD大鼠建立MI模型后随机分为5组:①空白对照组(C),②超声+微泡组(US+MB),③内皮祖细胞组(EPCs),④超声+内皮祖细胞组(US+EPCs),⑤超声+微泡+内皮祖细胞组(US+MB+EPCs)。建模成功后第3天,经尾静脉注入超声微泡,同时超声基因转染治疗仪辐照大鼠心前区,辐照条件:300 KHz、2 W/cm~2,辐照10 s,间隔5 s,共5 min。建模成功后第5天、第7天行同样处理,之后通过尾静脉注射感染Ad-EGFP/HIF-1α的EPCs。EPCs移植后48 h将大鼠处死,激光共聚焦显微镜观察大鼠心肌组织内EPCs的分布;Westernblot检测HIF-1α的表达。结果 US+MB+EPCs组绿色荧光强度高于其他各组,Western blot显示,US+MB+EPCs组HIF-1α蛋白表达高于其他组(P0.05)。结论超声破坏微泡联合Ad-EGFP/HIF-1α介导EPCs移植可有效促进EPCs归巢,为干细胞移植治疗IHD提供了一种新的途径。

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