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单拷贝转ω-黑麦碱干扰基因小麦的获得及其功能验证

李春燕  马秀英  柴建芳  秘彩莉  
【摘要】:1B/1R易位系小麦由于具有高产抗病适应性广等优点在我国的小麦生产中仍在广泛应用,但它有一个突出的缺点,就是加工品质普遍较差。ω-黑麦碱基因被认为是导致1B/1R易位系小麦加工品质差的一个重要原因,在我们的前期工作中,通过转小麦高分子量麦谷蛋白7亚基基因启动子驱动的ω-黑麦碱干扰基因,获得了多个ω-黑麦碱基因高度沉默的纯合转基因株系,其中部分转基因株系加工品质大幅度提高,稳定时间在8.0-20.5分钟,达到了强筋麦的水平,但由于是基因枪转化,拷贝数比较高,可能很难通过我国的安全性评价,为此,我们重新构建了ω-黑麦碱干扰基因的双T表达载体,并对1B/1R易位系小麦科农199进行了农杆菌转化,并获得大量转基因后代,经PCR检测和温室加代,从中筛选出8个只含ω-黑麦碱干扰基因而不含抗性筛选基因的转基因株系,进一步对这些转基因株系中的ω-黑麦碱基因的表达情况进行A-PAGE检测,其中有2个株系ω-黑麦碱基因高度沉默,而其它6个转基因株系没有表现沉默,再进一步对2个ω-黑麦碱基因高度沉默转基因株系的拷贝数进行Sourthern blot检测,发现2个转基因株系均为单拷贝。ω-黑麦碱基因高度沉默的单拷贝转基因小麦的获得为优质1B/1R易位系转基因小麦的最终产业化奠定了良好基础。

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