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应用伴侣分子在大肠杆菌表达系统高效表达家蝇天蚕素的研究

王炜  郑学礼  
【摘要】:目的应用伴侣分子在大肠杆菌表达系统中高效表达家蝇天蚕素,研究伴侣分子对家蝇天蚕素基因在大肠杆菌中表达的影响。方法 RT-PCR克隆家蝇的天蚕素成熟肽(MatureCecropin,MC)与泛素(Ubiquitin)基因,利用生物信息学方法分析Thioredoxin-MC和Thioredoxin-Ubiquitin-MC两种融合蛋白mRNA 5'端的二级结构的异同。分别构建pET32a-MC和pET32a-Ubiquitin-MC两种表达载体,转化入大肠杆菌(E.coli)BL21(DE3)中。比较质粒pET32a-MC和pET32a-Ubiquitin-MC在相同诱导时间及诱导剂浓度的条件下,蛋白质表达量的差异。结果 pET32a-Ubiquitin-MC的蛋白质表达量明显高于pET32a-MC。结论 Thioredoxin作为伴侣分子改变Cecropin的天然结构,使其对宿主菌无毒。Ubiquitin作为伴侣分子,在相同转录水平、翻译水平条件下,明显提高蛋白质表达量。

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