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《2010中国鹿业进展》 2010年
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东北梅花鹿鹿茸尖端组织全长cDNA文库的构建

郝丽  李和平  严历  
【摘要】:为克隆出与鹿茸生长发育相关基因的全长序列,采用SMART技术构建了东北梅花鹿鹿茸尖端组织的全长cDNA文库。用SV Total RNA Isolation System试剂盒提取总RNA,以逆转录酶PowerScriptTM反转录合成第一链cDNA,然后通过LD-PCR合成并扩增ds cDNA。扩增产物经纯化、SfiⅠ酶切、过CHROMASPIN-400柱去除小片段后,连接到SfiⅠ消化过的pDNR-LIB质粒载体中,最后用电转化法将重组质粒转化到E.coli DH5α内得到原始文库。经测定,构建的原始文库约含有2.56×106个重组子,插入片段多在0.5~2 kb之间,平均插入片段长度约1.1 kb,重组效率接近100%。结果表明,东北梅花鹿鹿茸尖端组织的全长cDNA文库已构建成功。

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