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《微生物与人类健康科技论坛论文汇编》2009年
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Modesto株副鸡禽杆菌血凝素基因的克隆表达及生物活性鉴定

王宏俊  安烨  龚玉梅  陈小玲  张培君  
【摘要】:目的克隆并原核表达Modesto株C型副鸡禽杆菌的血凝素基因,鉴定该重组血凝素的生物学活性。方法根据GenBank上已发表的Modesto株Apg的血凝素基因序列,设计合成了1对特异性引物,克隆Apg血凝素基因。以Modesto株Apg中提取的细菌DNA为模板,利用PCR扩增Apg血凝素全长基因(1026bp),将其克隆到pET-32a(+)载体上,构建了pET-HA原核表达载体pET-HA,表达并纯化重组蛋白,通过Western-blotting及血凝和血凝抑制试验鉴定该重组蛋白的生物学活性。结果表达并纯化了Apg HA重组血凝素蛋白,该蛋白可以和C型Apg抗血清特异性结合,并且可以凝集鸡红细胞。结论成功地构建了Modesto株Apg血凝素基因的原核表达载体,并表达纯化了Apg-HA融合蛋白,该重组血凝素具有凝集鸡红细胞的活性,为进一步研究Apg-HA的免疫功能奠定基础。

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【参考文献】
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