收藏本站
《微生物与人类健康科技论坛论文汇编》2009年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

A~D基因型乙型肝炎病毒全长逆转录酶区PCR方法的建立及应用

刘宝明  李彤  董建平  胥婕  李晓光  严平  王凤水  闫玲  李文鹏  金晖  杨靖娴  庄辉  
【摘要】:目的建立适用于扩增我国常见的乙型肝炎病毒(HBV)A~D基因型全长逆转录酶(RT)区(包含全长HBsAg编码区)的聚合酶链反应(PCR)法,并确定其在分析临床标本中的应用价值。方法建立我国HBV基因序列库,设计适用于扩增A~D基因型HBV全长RT区引物,以A~D基因型HBV重组质粒为模板建立半巢式PCR(snPCR)法,并确定该法灵敏度。用所建立的snPCR对44份HBV DNA定量阳性(5.0×10~2拷贝/mL)慢性乙型肝炎患者血清标本进行扩增及PCR产物直接测序。结果琼脂糖凝胶电泳及测序证实,snPCR可扩增A~D基因型HBV全长RT区,对A、B、C和D基因型HBV质粒扩增的灵敏度分别为1.2×10~3、7.0×10~2、6.0×10~2和6.0×10~2拷贝/ml。snPCR检测HBV DNA5×10~2拷贝/ml的血清标本的阳性率为88.64%(39/44),扩增阴性血清标本HBV DNA滴度均处于10~3拷贝/ml水平。扩增目的产物经直接测序确证无误。生物信息学分析显示,样品中B和C基因型分别占35.90%(14/39)和64.10%(25/39);其中15.38%(6/39)发生RT区变异,包括4例为已知耐药变异;7例(17.95%)存在HBsAg编码区变异,其中2例为已知免疫逃逸变异;6例(15.38%)发生RT区和HBsAg编码区"镜像改变"。结论建立了一种新的扩增全长RT区(涵盖全长HBsAg编码区)的snPCR。该法结合直接测序法,可同时分析我国HBV A~D基因型已知和潜在的耐药变异位点。

手机知网App
【参考文献】
中国期刊全文数据库 前4条
1 李文鹏;李彤;庄辉;;乙型肝炎病毒对拉米夫定耐药的研究进展[J];传染病信息;2007年01期
2 许廷贵 ,刘凤华;慢性HBV感染者HBsAg基因区变异的临床意义[J];国外医学.病毒学分册;2002年05期
3 庄辉;;我国乙型肝炎病毒感染与挑战[J];中华传染病杂志;2005年S1期
4 李文鹏;李彤;闫玲;刘宝明;庄辉;;1.2倍基因组长度C基因型乙型肝炎病毒重组体构建及其在HepG2细胞中表达和复制[J];肝脏;2008年03期
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 张艳兰;刘文芳;;乙型肝炎人免疫球蛋白在HBV意外暴露中的应用[J];中国输血杂志;2010年03期
2 池晓玲;萧焕明;樊正伦;;五运六气学说在慢性肝病中的应用[J];中华中医药杂志;2006年12期
3 陈绍玲;侯霞;;乙肝病毒携带孕妇健康知识调查与分析[J];护士进修杂志;2008年18期
4 徐俊斌;黄斯英;;阿德福韦酯治疗HBeAg阴性慢性乙型肝炎22例临床观察[J];实用肝脏病杂志;2008年03期
5 潘文;;广东省某高校新生乙型肝炎病毒感染状况[J];华南预防医学;2007年01期
6 张伟;龚诚华;姚楚珠;李丹;路娟;;2009年广州市越秀区食品及公共场所从业人员HBV感染状况分析[J];华南预防医学;2010年04期
7 苏元英;;心理干预对HBV感染者亚健康状态的影响研究进展[J];华夏医学;2010年05期
8 廖家文;张阳灵;;3~12岁在校常住儿童乙肝疫苗免疫效果分析[J];赣南医学院学报;2011年03期
9 项凤梅;卢建溪;王强;李永伟;陈伟;刘旭东;李刚;;含拉米夫定耐药基因的乙型肝炎病毒全基因组载体的构建及鉴定[J];国际内科学杂志;2008年01期
10 张金花;肖邦;毛黎;;HBV血清学标记物与HBV-DNA定量检测的相关性及临床意义[J];国际检验医学杂志;2009年03期
中国重要会议论文全文数据库 前2条
1 顾晓莺;;慢性乙型肝炎抗病毒药物的临床应用[A];2011年全国医药学术论坛交流会暨临床药学与药学服务研究进展培训班论文集[C];2011年
2 冯丽芬;谢俊强;邹霞;黄静芝;郭为林;郝元涛;;慢性乙肝病毒感染者羞辱与歧视量表的研制策略[A];2011年中国卫生统计学年会会议论文集[C];2011年
中国博士学位论文全文数据库 前4条
1 汤必奎;流感病毒感染致炎的表观遗传学机制研究[D];复旦大学;2010年
2 刘涛;琐琐葡萄抗乙肝病毒作用及其机制研究[D];新疆医科大学;2008年
3 谭畅;线粒体渗透性转变与乙肝病毒的复制的关系的研究[D];复旦大学;2008年
4 资捷;HBeAg影响人胎盘滋养层细胞TLR3/4表达效应及其在母婴传播中作用机制的研究[D];南方医科大学;2010年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 乔亚峰;梅州市某高校10年间新生乙肝病毒感染及携带状况的调查[D];暨南大学;2010年
2 杨帅;2265名医务人员乙型肝炎血清学标志物检测结果与感染相关因素分析[D];吉林大学;2011年
3 李斌;王宪波教授治疗慢性乙型重型肝炎经验总结和临床运用[D];北京中医药大学;2011年
4 杜旦;兰州市乙肝患者和家庭成员预防乙型病毒性肝炎KAP现况调查[D];兰州大学;2011年
5 侯军委;猪源TTV转录本的鉴定及荧光定量PCR检测方法的建立[D];中国农业科学院;2011年
6 肖和卫;中国15岁以上人群乙型肝炎免疫预防的决策分析模型研究[D];中南大学;2011年
7 郭晶;HbeAg、HbeAb、HBcAb定量与HBV-DNA、ALT定量的相关性及临床意义[D];新疆医科大学;2011年
8 赖娅芳;慢性乙型肝炎患者肝组织中HBVcccDNA定量与血清中IL-10、IFN-γ、TGF-β1水平之间的关系[D];宁夏医科大学;2010年
9 刘禄;乙型肝炎病毒表型耐药分析方法建立的研究[D];桂林医学院;2011年
10 陈刚;HBV基因的分子流行病学及临床意义研究[D];山西医科大学;2004年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 傅磊,吴雪,孔玉英,汪垣;乙型肝炎病毒核心启动子及其上游顺序对其基因表达的调控[J];病毒学报;1997年03期
2 倪宏,骆抗先,刘定燮,朱幼芙,马佩球,朱科伦;乙型肝炎病毒全基因重组真核表达质粒的构建[J];第一军医大学学报;2001年03期
3 孙剑;王程;温淑娟;王战会;侯金林;;乙型肝炎病毒拉米夫定耐药毒株的全基因质粒构建及其在HepG2细胞中复制与表达[J];南方医科大学学报;2007年07期
4 许廷贵,叶文;HBV前C/C区基因变异与干扰素治疗的影响[J];国外医学.病毒学分册;1998年01期
5 王宇平,江家骥;乙型肝炎病毒细胞模型研究进展[J];国外医学.流行病学传染病学分册;2004年05期
6 徐维祯;李迪;李桂秋;张淑云;房勇;谷鸿喜;;HBV YIDD变异株真核表达载体的构建及鉴定[J];微生物学杂志;2007年05期
7 侯金林,骆抗先,梁炽森,王战会;HBsAg阴性乙型肝炎病毒感染与S基因插入变异的关系[J];中华传染病杂志;1996年03期
8 邱望龙,姚集鲁;HBV基因变异与临床关系[J];中华传染病杂志;1998年01期
9 龚晓红,刘立荣,贾蕾,李阳桦,邢玉兰,王全意;北京市新生儿接种乙型肝炎疫苗的流行病学效果评价[J];中华肝脏病杂志;2003年04期
10 唐霓,黄爱龙,张秉强,闫歌,向明确,蒲丹,郭晖;1.3倍乙型肝炎病毒全基因真核表达载体的构建及在HepG2细胞中的表达[J];中华肝脏病杂志;2003年08期
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 刘蓉,罗必蓉,余蓉,唐玲,喻华;耐万古霉素肠球菌表型及基因型分析[J];四川省卫生管理干部学院学报;2003年02期
2 张仲全;赵安成;;血清HBV—DNA与HBV血清标志物的相关性研究[J];社区医学杂志;2008年17期
3 佟松;李玉军;苏辉;包丽丽;张凤民;;哈尔滨地区肝炎患者血清中HBV DNA基因型分析[J];哈尔滨医科大学学报;2008年01期
4 潘春燕;谢春英;王燮衡;王爱琴;;溶血对乙型肝炎病毒DNA定量检测的影响[J];右江医学;2008年01期
5 单幼兰;王箭;尹一兵;;HBV cccDNA荧光定量PCR检测方法的建立及初步应用[J];重庆医科大学学报;2007年06期
6 潘春燕;莫宝妹;刘倩如;谢春英;;抗凝剂对定量检测乙型肝炎病毒DNA的影响[J];中国热带医学;2008年04期
7 邓少丽,罗阳;荧光定量PCR技术及其在临床上的应用[J];国外医学.临床生物化学与检验学分册;2002年05期
8 闵晓春;赵书民;杨德刚;;三种检测乙型肝炎病毒YMDD自然变异方法的比较[J];实用肝脏病杂志;2010年01期
9 郭晋海,邵锡如;PCR检测HBV-DNA及其临床意义探讨[J];青海医学院学报;1997年01期
10 耿志华,祝扬,罗畅民,邓松华;用SRID法检测结核性胸水中活动性结核标记物的意义[J];疾病控制杂志;1999年02期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 刘宝明;李彤;董建平;胥婕;李晓光;严平;王凤水;闫玲;李文鹏;金晖;杨靖娴;庄辉;;A~D基因型乙型肝炎病毒全长逆转录酶区PCR方法的建立及应用[A];微生物与人类健康科技论坛论文汇编[C];2009年
2 王平;王辉;许文兵;朱元珏;;肺组织结核分枝杆菌巢式PCR快速检测[A];中华医学会呼吸病学年会——2011(第十二次全国呼吸病学学术会议)论文汇编[C];2011年
3 回文广;赵廷昌;孙福在;张卉;王建荣;高孝强;田丽;;实时荧光定量PCR原理及其应用[A];中国植物病理学会第六届青年学术研讨会论文集——植物病理学研究进展(第五卷)[C];2003年
4 张华;温志立;吴平;张海明;;采用多对型特异性引物巢式PCR法研究江西乙型肝炎病毒基因型分布及其与临床的相关性[A];首届江西省中西医结合肝病学术研讨会、首届江西省中西医结合肝病新进展学习班资料汇编[C];2008年
5 周素娟;张铁军;何纳;;HCV的C/E1区PCR扩增方法的改进[A];华东地区第十次流行病学学术会议暨华东地区流行病学学术会议20周年庆典论文集[C];2010年
6 孙秋影;卢长春;魏强;庞淑芬;;LightCycler 480实时荧光定量PCR仪在献血者血液筛查中的应用[A];中国输血协会第五届输血大会论文专集(摘要篇)[C];2010年
7 商红艳;程祖建;欧启水;;建立PCR熔解曲线法检测HBV基因型[A];中华医学会第九次全国检验医学学术会议暨中国医院协会临床检验管理专业委员会第六届全国临床检验实验室管理学术会议论文汇编[C];2011年
8 孔艳;吴小红;杨立宏;安祺;董关木;俞永新;;逆转录酶活性检测荧光定量PCR方法[A];2010年中国药学大会暨第十届中国药师周论文集[C];2010年
9 曹杰;仝彩玲;周勇志;张厚双;周金林;;荧光定量PCR检测硬蜱体内莱姆病螺旋体的研究[A];中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第二次学术研讨会论文集[C];2010年
10 李志艳;王敏;朱钧;谭孟群;;实时荧光定量PCR在腺相关病毒滴度测定中的应用研究[A];传承与发展,创湖南省生理科学事业的新高——湖南省生理科学会2011年度学术年会论文摘要汇编[C];2011年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 本报记者 李颖;多元产品的创新之道[N];科技日报;2011年
2 记者 蒋寒;新型甲型流感病毒快速检测试剂通过预审[N];科技日报;2009年
3 通讯员 郝成涛 记者 范又;我研制出诊断新甲型H1N1流感病毒配套试剂盒[N];光明日报;2009年
4 记者 曾毅 通讯员 魏光庆;5小时内可获得检测结果[N];光明日报;2009年
5 郝成涛;甲型H1N1流感病毒检测试剂形成配套体系[N];科技日报;2009年
6 记者 李力;我国研制出猪感染甲型H1N1病毒检测试剂盒[N];经济日报;2009年
7 本报记者 邓丽;甲型H1N1流感快速诊断试剂揭秘[N];21世纪经济报道;2009年
8 记者李建伟;河南研制成功快速检测甲型H1N1流感病毒试剂[N];中国知识产权报;2009年
9 国家食品药品监管局药品审评中心信息部 董江萍 伍红艳;FDA紧急授权使用的H1N1流感抗病毒药物和诊断试剂介绍[N];中国医药报;2009年
10 记者 陈磊;8种甲流核酸检测试剂被推荐使用[N];科技日报;2009年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 孟双;避免乙型肝炎病毒和丙型肝炎病毒核酸漏检的新型实时荧光PCR方法的研究及其内标的建立[D];中国协和医科大学;2010年
2 肖性龙;多重荧光PCR与液相芯片高通量病原体检测体系的建立与应用[D];华南理工大学;2010年
3 夏乾峰;二聚体突变引物定量PCR技术的研发及其临床应用[D];重庆医科大学;2011年
4 李桂民;HBV、HCV、HIV-1荧光定量PCR检测体系的建立和应用[D];东北师范大学;2011年
5 张彩萍;PCR-RFLP分析分枝杆菌Hsp65基因时三种凝胶电泳的比较研究及临床应用[D];中国协和医科大学;2009年
6 刘盈;氟西汀治疗重性抑郁障碍药效学作用与5-HT_(1A)R基因C(-1019)G多态性及磁共振脑结构成像的关系研究[D];中国医科大学;2007年
7 刘颖;人类粪便中小肠结肠炎耶尔森菌检测方法的研究[D];南方医科大学;2011年
8 窦立萍;异基因造血干细胞移植中KIR作用及其机制的研究[D];中国人民解放军军医进修学院;2007年
9 黄靖;定量聚合酶链反应热循环系统及荧光检测技术研究[D];浙江大学;2012年
10 陈庆海;多重分子信标探针芯片构建与结核杆菌耐药基因多重突变位点检测研究[D];第三军医大学;2008年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 单幼兰;HBV cccDNA荧光定量PCR检测方法的建立及初步应用[D];重庆医科大学;2005年
2 唐九歌;三联放大技术与荧光定量PCR在血液筛查乙型肝炎病毒中的比较[D];新疆医科大学;2010年
3 金戈;博尔纳病病毒磷蛋白的原核表达和p24片段荧光定量PCR试剂盒的研制开发[D];重庆医科大学;2011年
4 刘宁;PCR扩增16srRNA基因以快速诊断败血症及分型细菌[D];南昌大学;2010年
5 陈继军;TaqMan实时定量PCR检测轮状病毒G4型VP7基因方法的建立[D];兰州大学;2010年
6 魏琼;沙门氏菌、志贺氏菌和金黄色葡萄球菌多重荧光定量PCR快速检测方法的研究[D];吉林农业大学;2011年
7 谷雅君;散在重复序列PCR检测肺炎支原体的方法建立及临床应用[D];天津医科大学;2010年
8 饶春梅;荧光定量PCR检测社区获得性肺炎患者痰标本中肺炎链球菌的研究[D];大连医科大学;2010年
9 刘广华;聚合酶链反应—酶联免疫吸附法检测军团菌的实验研究[D];吉林大学;2005年
10 李淳;肺炎支原体的检测和分型及耐药基因突变位点分析[D];南华大学;2011年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026