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《第二届全国生物入侵学术研讨会论文摘要集》2008年
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管氏肿腿蜂触角气味结合蛋白的分子克隆及免疫定位

李祥瑞  孙飞  刘小侠  张青文  
【摘要】:本研究采用生物化学方法及分子生物学方法研究了管氏肿腿蜂Scleroderma guani Xiaoet Wu的气味分子结合蛋白(Odarant-binding proteins,OBPs)和化学感受蛋白(Chemosensoryproteins,CSPs)的生化特性,并进行了基因的克隆及蛋白结构预测;之后采用分子生物学方法检测了OBPs和CSPs在管氏肿腿蜂各组织中的表达,并采用免疫细胞化学方法研究了OBPs和CSPs在感觉器官中表达及其在组织中的分布,初步探讨了OBPs和CSPs的生理功能。主要结果如下:1.采用非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分析,发现管氏肿腿蜂雌虫触角中特异表达的三个蛋白条带,推断可能为气味结合蛋白。这些3个条带经N-端测序,设计兼并引物,进行3'RACE和5'RACE扩增获得3个蛋白基因的全长序列。经过序列分析和Genebank BLAST,结果表明,这三个蛋白分别是:2个气味结合蛋白和1个化学感受蛋白。我们将其分别命名为Sgua-OBP1,Sgua-OBP2和Sgua-CSP1。序列比对分析显示Sgua-OBP1和Sgua-OBP2与其他昆虫已知的OBPs序列同源,Sgua-CSP1则与已知的昆虫CSPs类蛋白同源。利用生物信息学方法,对Sgua-OBP1,Sgua-OBP2和Sgua-CSP1进行分析,发现它们开放阅读框(ORF)分别编码133、142、129个氨基酸序列的蛋白,并对其二级、三级结构进行了模拟预测。2.将得到的三个蛋白基因序列构建原核表达载体并进行原核表达,获得大量重组蛋白。重组蛋白经Ni-NTAHis bind rasin层析柱纯化回收,用于制备多克隆抗体。Westernblot结果表明:SguaCSP1在管氏肿腿蜂各个组织都有表达,而SguaOBP1和SguaOBP2仅在触角组织中特异表达。3.结合扫描电镜和透射电镜观察结果,发现在管氏肿腿蜂两性触角中共存在8种类型的化学感器,分别是毛形感器、刺形感器、锥形感器、长锥形感器、栓锥形感器、耳形感器、鳞型感器和钟形感器。通过比较发现雄虫的感器无论在数量上还是种类上都比雌虫要少。免疫细胞化学实验结果表明,SguaCSP1几乎可以在所有感器中表达,SguaOBP2仅在栓锥形感器中表达,三种蛋白都在栓锥形感器中协同表达,在厚壁和单孔感器中均不表达。
【作者单位】:中国农业大学农学与生物技术学院
【分类号】:S769

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