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《第二届全国生物入侵学术研讨会论文摘要集》2008年
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磁珠富集法筛选瓜实蝇微卫星位点

伍祎  李志红  
【摘要】:瓜实蝇属于双翅目(Diptera)实蝇科(Tephritidae)的昆虫。是东南亚、印度次大陆、南太平洋地区、非洲热带和亚热带地区及夏威夷一带瓜类蔬菜和水果的重要害虫之一,在我国主要分布于云南、广西、广东、海南、福建、台湾等西南地区,是南方实蝇类的优势种。近几年,微卫星(Microsatellites)分子标记以其多态信息容量高、共显性表达、可重复性好、容易检测等优点已广泛应用于DNA指纹图谱构建、系统发育推断和种群遗传学等方面的研究。本研究旨在筛选多态性丰富的微卫星位点为瓜实蝇的遗传多样性及种群遗传结构分析提供DNA的分子标记。根据生物素(biotin)与链亲和素(streptavidin)的强亲和性原理,用粘端限制性内切酶Sau 3AI消化瓜实蝇基因组DNA,回收300-1200bp的片段,连接上人工接头,与生物素标记的微卫星寡核苷酸探针(CT)_(12)、(GT)_912)和(GCA)_8退火结合,用链亲和素磁珠(Dynabeads M-280 Streptavidin)亲和捕捉,获得含有微卫星序列的单链目的片段,经PCR扩增形成双链后克隆测序,首次成功构建了瓜实蝇基因组微卫星富集文库。用引物设计软件Primer Premicr 3.0设计微卫星位点引物,优化引物扩增条件后给引物加上荧光于测序仪上检测微卫星多样性。最终筛选出9对能够稳定扩增瓜实蝇个体的微卫星位点,对来自云南、海南和广东3个地理种群的180头瓜实蝇样品进行多样性检测。最终得到9个多态性位点:等位基因数在5到27之间;观测杂合度为0.1139-0.5787;期望杂合度为0.1448-0.8777;无连锁不平衡现象。这些瓜实蝇微卫星位点对于研究瓜实蝇种群遗传关系,分析瓜实蝇各地理种群间的近交程度和遗传距离,进一步揭示其起源、扩散路线和扩散趋势等重要问题具有深远意义。
【作者单位】:中国农业大学农学与生物技术学院
【分类号】:S433

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