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《浙江省第四届动物学博士与教授论坛、动物学与经济强省-浙江省动物学研究及发展战略研讨会论文摘要集》2017年
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DNA条形码用于浙江海洋鱼类鉴定初探

管峰  金雨婷  徐敬  赵进  
【摘要】:随着人们生活水平的提高,鱼类成为餐桌上常见的一道菜肴,同时鱼类也是国际化贸易的重要组成部分,但也成为掺假以及乱贴标签的重要食品材料之一。由于鱼类较为复杂的形态多样性,加上趋同进化的干扰,有时仅靠形态特征很难进行准确鉴定。而基于蛋白水平的生化方法也由于深加工鱼类中蛋白质变性降解等原因,此方法的分析结果不稳定,可靠性较低。随着分子生物学的发展,DNA序列分析给物种鉴定技术带来了快速发展的契机,Hebert等提出了DNA条形码(DNAbarcoding)的概念,之后这一技术被广泛用于多种动植物的分类鉴定研究中。当前,DNA条形码已经成为现代物种鉴定的重要手段,但在应用中也发现其不足,因此对鱼类鉴定用的COI基因条形码经过多次引物的优化与改进。为探究DNA条形码鉴定方法对浙江省海产品的鉴定效果,本实验选用鱼类DNA条形码通用引物和优化引物,对收集的39种海产品进行序列分析和种类鉴定,结合形态学鉴定结果以判定其种类名称与真实物种的一致性,从而判断DNA条形码用于浙江海产品鉴定的适用性。参照文献并在预实验后确定PCR反应体系为20μL,包含(含mg~(2+))10×Buffer 2μL,上引物FlshF2-t1 1μL,VF2-t1 1μL下引物FlshR2-t1 1μL,FR1d-t1 1μL,dNTP1.6μL,Taq酶0.2μL,模板DNA 3μL,超纯水9.2μL。PCR反应条件:95℃预变性5min;30个循环×(95℃变性30s,53℃退火30s,72℃延伸30s);72℃延伸10min。然后对PCR产物检测并测序。测序采用M13正反引物或PCR引物双向测序并拼接结果。将测序结果在GenBank和BOLD两个数据库中进行对比,验证对比所得的物种是否和外形鉴定的物种一致,评测DNA条形码对物种鉴定的准确性。结果显示32个鉴定到种的样品中有25种样品与其形态学鉴定完全一致,可以鉴定到种及亚种分类级别,一致性为78.1%;其余7种用条形码鉴别到目的有5种,鉴别到科的有2种;在检测的7个鱼加工制品中有3个样品与其标注名称相符,一致性仅为42.8%,其余4个样品名称均与实际成分不符。本研究结果表明DNA条形码可用于浙江常见鱼类品种的分子鉴定,但受到物种分类信息数据库以及物种多样性的影响,部分种类无法鉴定到种,需要其他基因作为鉴定的补充。同时,目前鱼类产制品的名称标注乱象或者说掺假现状较为严重。
【作者单位】:中国计量大学生命科学学院
【分类号】:Q959.4

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