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《2014浙江省医学会精神病学分会学术年会、浙江省医师协会精神科医师分会第七届年会论文汇编》2014年
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无血清培养胎鼠海马神经元的优化方法

张学平  XIA Yong  
【摘要】:目的优化传统的无血清培养海马神经元的方法,为体外神经元研究提供纯度高、细胞活性好,体外存活时间长的体外实验模型。方法颈椎脱臼处死孕16-18天w1star孕鼠,迅速取海马,剥离血管网等结缔组织后,消化并吹打制成细胞悬液,以适当的密度接种入DMEM/HG培养基,4小时后换用Neurobasal+B27培养基,以后每2-3天进行1/3量换液。倒置显微镜观察神经元的形态变化,采用CCK-8试剂盒检测神经元活性,并利用神经元特异性烯醇化酶(NSE)鉴定神经元纯度。结果细胞接种4小时后贴壁,随着培养时间的延长神经元的形态发生一系列变化,从圆形、透亮、体积小逐渐变为椭圆形、三角形或椎形,有光晕,胞体增大,突起伸长且分支增多,在培养第4天后逐渐连接呈网络状。神经元纯度随时间的延长逐渐升高,培养第7天纯度高达90%以上。神经元在培养的第9、10天达到成熟,即可用于后续研究。结论本实验方法简便易行,神经元纯度高、细胞活性好,体外存活时间长,是体外研究的良好实验模型,值得推广应用。
【作者单位】:杭州市第七人民医院
【分类号】:Q42

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