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《2007年浙江省神经病学学术年会论文汇编》2007年
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左旋咪唑对EAE大鼠炎症细胞表面CD4、CD8及B7、CD28/CTLA-4协同刺激分子表达的影响

邱伟文  吴赛珍  卢晔芬  郑荣远  
【摘要】:目的:观察左旋咪唑(LMS)对实验性变态反应性脑脊髓炎(EAE)大鼠炎症细胞表面 CD4、CD8的影响,以及对 B7、CD28/CTLA-4协同刺激分子表达水平的影响,以进一步了解 LMS 促发 EAE 的病理生理过程中的重要环节。方法:雌性 Wistar 大鼠55只(150~180g)随机分成5 组:LMS 同时给药组(12只)、LMS 预处理组(12只)、EAE 模型组(12只)、单纯 LMS 致敏组 (12只)及对照(Control)组(7只)。模型制作与 LMS 给药干预方法略。每天两次观察体重及行为学变化。致敏后第7、17及25d 分别心脏采血500μl,24h 内送检。第25d 处死动物,取一小段颈髓及脑组织以4%多聚甲醛固定,送做病理学检查。其余脊髓经消化、梯度分离,提取单个核细胞, 荧光抗体孵育标记后上流式细胞仪检测,CellQuest 软件获取结果。以 CD4、CD8、B7-1、B7-2、CD28 及 CTLA-4阳性细胞数的百分比表示 CD4、CD8、B7-1、B7-2、CD28及 CTLA-4分子的表达水平。结果:(1)行为学观察结果:EAE 模型组:发病率6/12,症状评分平均值为1.8±0.75;LMS 同时给药组和 LMS 预处理组:发病率分别为10/12、9/12,与 EAE 模型组比较,无显著差异。潜伏期平均值分别为14.8±1.79、15.5±2.27,较 EAE 模型组明显缩短(P0.05)。症状评分平均值分别为3.2±0.79、 3.1±0.84,较 EAE 模型组明显加重(P0.01):单纯 LMS 致敏组及 Control 组:未观察到尾巴及肢体无力、麻痹等异常。(2)病理学检查结果:EAE 模型组:发病动物脊髓及大脑内,组织 HE 染色观察到血管周围不同程度的炎性细胞浸润,主要表现为血管套形成,髓鞘 Luxol Fast Blue 染色发现局灶性神经髓鞘变性、脱失;LMS 同时给药组和 LMS 预处理组:发病大鼠 CNS 炎性细胞浸润和脱髓鞘较 EAE 模型组有加重趋势。(3)外周血及脊髓内炎症细胞表面 CD4、CD8表达:抗原致敏后7d, LMS 同时给药组和 LMS 预处理组外周血淋巴细胞表面 CD4表达水平分别为53.96±5.80、54.55±5.84, 较 EAE 模型组(46.89±3.88),明显增高(P0.05),CD8表达分别为29.75±2.22、30.06±2.54,与 EAE 模型组(33.15±2.57)比较,无显著差异,致敏后17、25d,CD4表达水平有下降趋势。LMS 同时给药组和 LMS 预处理组发病大鼠脊髓内单个核细胞表面 CD4的表达水平分别为62.0±9.39、 64.6±6.36,较 EAE 模型组(37.8±5.16),明显增高(P0.01),而 CD8的表达水平各组无明显变化。 (4)外周血及脊髓内炎症细胞表面 B7-1/B7-2:CD28/CTLA-4协同刺激分子表达:抗原致敏后7d, LMS 同时给药组和 LMS 预处理组外周血淋巴细胞表面 CD28表达水平分别为63.51±6.19、 62.18±6.93,较 EAE 模型组(55.95±3.60),明显增高(P0.05),致敏后17、25d,CD28表达水平有下降趋势。而 B7-1、B7-2、CTLA-4表达未见明显变化;LMS 同时给药组和 LMS 预处理组发病大鼠脊髓内单个核细胞表面 CD28的表达水平分别为25.4±6.05、31.3±7.03,较 EAE 模型组 (14.4±2.55),明显增高(P0.01)。LMS 同时给药组和 LMS 预处理组发病大鼠脊髓内单个核细胞表面 B7-1/B7-2的表达水平分别为5.00±1.02/8.29±1.73、5.46±0.77/8.84±0.90,也较 EAE 模型组 (2.24±0.14/3.93±0.51)增高(P0.01)。而 CTLA-4的表达似有减少,但无统计学意义。结论:(1) 实验能够重复 LMS 对 EAE 有加重作用。(2)LMS 预处理也能加重 EAE,提示 LMS 预处理所导致的免疫失衡可以延续一定的时间段,在此阶段内,接受神经抗原致敏,异常免疫应答可被上调,从而加重和促发 EAE。(3)LMS 能够上调炎症细胞特别是神经组织内单个核细胞 CD4及 B7/CD28协同刺激分子的表达。该病理生理现象可能展示 LMS 加重和促发 EAE 的重要作用环节。

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