收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

Mdr1在Lewis肺癌化疗中疗效及骨髓保护的实验研究

金先庆  
【摘要】:【目的】探讨 mdr1基因转染移植骨髓造血细胞在 Lewis 肺癌模型中疗效及骨髓的保护作用。【方法】 1、PCR 法体外克隆出目的基因并将该基因采用定向克隆的方法克隆进入穿梭质粒 pAdTrack-CMV 中,采用同源重组方法将该质粒和腺病毒质粒 Adeasy-1连接,最后通过脂质体介导的方法导入包装细胞 HEK293中,产生表达目的基因的重组腺病毒 Ad5-MDR1;2、采用乒乓交互感染收集并浓缩病毒上清,采用浓缩病毒上清转染法将 mdr1基因导入肿瘤坏死因子α(TNF-α)预处理后的 C57小鼠骨髓单个核细胞,采用 RT-PCR 法、Western-blot 分别从基因、蛋白质水平检测 mdr1基因在小鼠骨髓单个核细胞中的功能性表达, 柔红霉素排出试验从功能水平检测 mdr1基因在小鼠骨髓单个核细胞中的功能性表达情况,探讨转染时间和转染效率、功能之间的关系;3、将 C57小鼠骨髓单个核细胞与含有人全长 mdr1 cDNA 的腺病毒共培养4日后,将转染细胞经骨髓腔注射移植入经~(60)CO 放疗预处理的 Lewis 肺癌荷瘤小鼠体内,然后进行超剂量表阿霉素化疗实验,检测 mdr1基因对受体骨髓的保护作用、超剂量化疗对肿瘤的治疗作用。同时采用 RT-PCR 法、Western blot 法分别从基因、蛋白水平检测外源性 mdr1基因在受体骨髓的表达情况。【结果】 1、PCR 法克隆出目的基因 MDR1,定向克隆成功构建重组质粒 pAdTrack-MDR1,同源重组腺病毒质粒 Adeasy-MDR1导入包装细胞 HEK293中形成表达 mdr1的高滴度重组腺病毒 Ad5-MDR1。2、收获的病毒感染液滴度达8.3×1011pfu/ml;流式细胞仪测得体外转染率可达到26.26%;柔红霉素排出试验证实导入的 mdr1基因表达产物 P-gp 有药物外排泵功能;RT-PCR 法证实外源性 mdr1基因有效地在小鼠骨髓单个核细胞基因组表达;Western-blot 测得转染后 P-糖蛋白(P-glycoprotein P-gp)表达较转染前明显增高;3、采用培养细胞注射法成功建立 Lewis 肺癌动物模型; 采用骨髓腔内注射移植后一月受体骨髓中有外源性 mdr1基因的功能性表达;超剂量化疗实验中,转染 mdr1基因的荷瘤小鼠能耐受3倍剂量表阿霉素的化疗, 化疗3周后实验组外周血白细胞可维持在正常范围(5.3±0.66),同时肿瘤能被有效治疗,荷瘤动物的生存时间及生存质量明显高于对照组(P0.05),对照组荷瘤动物死于超剂量化疗所造成的严重骨髓抑制或肿瘤扩散。【结论】 1、采用 AdEasy-1腺病毒载体系统重组了 MDR1基因腺病毒 Ad-MDR1;2、通过 TNF-α预处理的方法将 mdr1基因转染单个核细胞的转染率提高到26.26%;RT-PCR 和 Western blotting 方法证实外源性 mdr1基因在转染骨髓单个核细胞基因组中功能性表达,柔红霉素排出试验证实导入的 mdr1基因表达产物 P-gp 有药物外排泵功能;3、检测到外源性 mdr1基因可在受体骨髓中功能性表达1个月;4、采用 mdr1基因转染移植能够有效保护超剂量下化疗药物对骨髓的损伤,同时提高对 Lewis 肺癌的治疗效果。

知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 吴颖;肖敏;朱莉;周晓曦;龚泉;辛星;李春蕊;周剑峰;邓金牛;;91例急性白血病患者骨髓单个核细胞CD96分子的表达研究[J];中国实验血液学杂志;2011年03期
2 朱建华;杨德圣;;基因治疗用于牙周组织再生的研究进展[J];武警医学院学报;2011年07期
3 唐忠仁;刘影哲;周亚滨;栗德林;;养心颗粒对p53基因转染易损斑块家兔模型血清C反应蛋白含量的影响[J];中国医药指南;2011年16期
4 席琼;胡巢凤;张芸;陆大祥;蒋宇;;RIP2对大肠杆菌的抗菌作用研究[J];中国病理生理杂志;2011年05期
5 张喜君;李开艳;;共聚物的应用和研究进展[J];实用医学杂志;2011年12期
6 施新革;宗海斌;董玉珍;侯文根;梁秋冬;;阳离子脂质体介导神经营养因子-3在大鼠雪旺细胞中的表达[J];军医进修学院学报;2011年09期
7 孙霁;陈琰;鲁莹;钟延强;;阴离子脂质体-阳离子脂质体复合物介导的基因转染[J];药学实践杂志;2011年04期
8 徐洪涛;马路;高连如;常晓峰;张宁坤;田海涛;王津;朱智明;费宇行;杨晔;陈宇;李贤峰;;急性心肌梗死患者骨髓单个核细胞移植前后血浆尾加压素Ⅱ和脑钠肽的变化[J];中华保健医学杂志;2011年04期
9 陈东晓;朱远丰;;负载HPV18E7基因树突状细胞瘤苗抗食管癌细胞的体外实验[J];中外医学研究;2011年24期
10 陈鹏;张俭;王磊;张敏州;;通冠胶囊对骨髓单个核细胞向损伤血管内膜迁移分化的影响[J];中国中西医结合杂志;2011年09期
11 邓永忠;赵轶男;白峰;袁媛;刘昌胜;高文魁;董鑫;;多孔CPC材料复合转染VEGF的骨髓间充质干细胞修复大鼠颅骨缺损的实验研究[J];科学技术与工程;2011年16期
12 胡晓燕;白海;潘耀柱;王存邦;吴冰;赵强;艾昊;陈哲;韩夏;;自噬相关基因Beclin1和MAPLC3在急性白血病骨髓单个核细胞中的表达及其意义[J];中国实验血液学杂志;2011年03期
13 张云强;徐爱国;齐向前;;骨髓单个核细胞移植对心肌基质细胞衍生因子1-CXCR4轴的影响[J];中国组织工程研究与临床康复;2011年27期
14 刘丽霞;王永成;;神经干细胞转基因疗法与运动性脊髓损伤的治疗[J];中国组织工程研究与临床康复;2011年27期
15 应希;王一;;αA晶状体蛋白重组腺病毒载体的构建和鉴定[J];眼科新进展;2011年09期
16 李卫星;杜军;胡圳圳;田寅辉;刘皎婧;朱一超;;稳定表达GFP-C-Daam1的MDA-MB-231人乳腺癌细胞系的建立[J];南京医科大学学报(自然科学版);2011年07期
17 刘应兰;杨靖;钟警;曹仁贤;;S100A13基因的高表达对HepG2细胞生物学性状影响的研究[J];中国现代医学杂志;2011年16期
18 李超;杨丹;石芳琼;李跃辉;陈新群;翦新春;蒋灿华;;MHC-Ⅰ类链相关基因A真核表达载体的构建及稳定转染舌鳞癌细胞的实验研究[J];华西口腔医学杂志;2011年04期
19 赵燕敏;孙爱军;;急诊经冠状动脉自体骨髓单个核细胞移植对急性心肌梗死患者远期心功能的影响[J];上海医学;2011年08期
20 张洁;刘巍;朱新辉;周怡;;转腺病毒-人骨形态发生蛋白7软骨细胞分泌的透明质酸和Ⅱ型胶原[J];中国组织工程研究与临床康复;2011年28期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 金先庆;;Mdr1在4T1乳腺癌化疗中疗效及骨髓保护的实验研究[A];中国抗癌协会第七届全国小儿肿瘤学术会议论文汇编[C];2007年
2 肖海波;张绍明;梅举;;血管内皮生长因子基因转染内皮祖细胞移植于缺血心肌的实验研究[A];中华医学会第七次全国胸心血管外科学术会议暨2007中华医学会胸心血管外科青年医师论坛论文集心血管外科分册[C];2007年
3 金先庆;;Mdr1在Lewis肺癌化疗中疗效及骨髓保护的实验研究[A];中国抗癌协会第七届全国小儿肿瘤学术会议论文汇编[C];2007年
4 郑水儿;金洁;童向民;钱文斌;薛永权;;干扰素-α联合GM-CSF诱导慢性粒细胞白血病细胞向树突状细胞分化[A];2005年华东六省一市血液病学学术会议暨浙江省血液病学学术年会论文汇编[C];2005年
5 肖佩芳;柴忆欢;何军;邵雪军;何海龙;王易;李桢萍;李建琴;李捷;卢俊;吕慧;;cAMP反应元件结合蛋白在儿童急性髓细胞白血病中的表达及其意义[A];中国抗癌协会第七届全国小儿肿瘤学术会议论文汇编[C];2007年
6 李安民;张志文;郭晓明;;自体外周血骨髓单个核细胞脑移植治疗精神发育迟滞[A];中国医师协会神经外科医师分会第六届全国代表大会论文汇编[C];2011年
7 黄榕翀;姚康;李延林;章轶琦;徐世坤;施鸿毓;潘翠珍;杨珊;张少衡;葛雷;牛玉宏;张峰;钱菊英;邹云增;葛均波;;经冠状动脉骨髓单个核细胞移植治疗原发性扩张型心肌病的安全性与疗效近期观察[A];中华医学会心血管病学分会第八次全国心血管病学术会议汇编[C];2006年
8 施益芬;俞康;;苯及代谢物对骨髓细胞拓扑异构酶Ⅱα表达和活性的影响[A];中华医学会第11届全国内科学术会议论文汇编[C];2007年
9 张秀亚;王珊;李圆;孔祥如;王江波;;多药耐药基因转染对荷瘤小鼠骨髓造血细胞的保护作用[A];中国西南地区第九届小儿科学术会议论文汇编[C];2008年
10 杨博华;吴鲁辉;秦建辉;朱龄群;;自体骨髓单个核细胞移植与中药合用治疗糖尿病下肢动脉缺血[A];全国中西医结合周围血管病专题研讨会论文汇编[C];2005年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 曹毅;用基因打靶技术构建恶性疟原虫MSP1转基因鼠疟模型及其应用[D];第二军医大学;2005年
2 梁日生;转TrkC基因神经干细胞移植治疗脊髓损伤的实验研究[D];复旦大学;2005年
3 张瑞芬;金属硫蛋白与乳腺癌关系的研究[D];中国协和医科大学;1999年
4 周艳;乳腺癌ERβ表达的临床意义及其与他莫昔芬治疗耐药相关意义的初步研究[D];第三军医大学;2007年
5 欧雅莉;GDNF基因修饰脐血细胞并血脑屏障开放剂对高血压脑梗疗效的实验研究[D];中南大学;2009年
6 李晓强;转染VEGF165基因的内皮祖细胞移植治疗慢性深静脉血栓的实验研究[D];苏州大学;2008年
7 尚全良;同种异体骨髓单个核细胞肝内移植治疗急性肝损伤的磁共振扩散成像实验研究[D];中南大学;2009年
8 张云强;自体骨髓单个核细胞移植治疗心力衰竭[D];天津医科大学;2009年
9 唐洁;经冠脉自体骨髓单个核细胞移植修复梗死心肌的实验观察[D];天津医科大学;2008年
10 汪圣毅;腺病毒介导hIL-10基因转染联合IFN-γ抑制血管平滑肌细胞增殖及其机制的研究[D];复旦大学;2005年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 许杰;TGF-β1转基因牙龈成纤维细胞生物学特性及其胞内信号转导的初步研究[D];第四军医大学;2005年
2 赵静;脂质体介导转染的绿色荧光蛋白基因在骨髓基质细胞内表达[D];山东大学;2005年
3 骆书美;超声微泡介导pEGFP-N1转染人牙龈成纤维细胞的初步研究[D];重庆医科大学;2009年
4 姚珂;反义PNA抑制端粒酶活性对肺癌A549细胞影响的研究[D];第三军医大学;2004年
5 梁政;rAAV/AFP转染对人外周血单核细胞来源树突状细胞免疫刺激功能研究[D];第一军医大学;2005年
6 林桂渺;TIMP-3真核表达载体构建以及在前列腺癌细胞株中作用的研究[D];吉林大学;2006年
7 种瑞峰;p21~(waf1)基因转染对乳腺癌细胞增殖活性和中心体复制的影响[D];青岛大学;2008年
8 林霞;纳米基因载体酶切保护机理的研究及新型基因载体的制备与应用[D];湖南大学;2005年
9 孙书军;温度敏感壳聚糖—接枝-NIPAAm/VL共聚物转基因载体[D];天津大学;2005年
10 魏先森;转染Noggin基因的骨髓基质细胞在体外分化为神经元样细胞的初步研究[D];山东大学;2006年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 ;发挥中西医结合优势 开拓冠心病治疗新领域[N];中国医药报;2003年
2 董志翔;细胞移植治疗心衰成功[N];科技日报;2003年
3 阿基 牛剑 余志平 张贵华 风信 贵华 陆志城 朱明;生物疗法又有新花样[N];医药经济报;2002年
4 记者 王勇;重庆诞生世界首台超声妇科治疗仪[N];医药经济报;2003年
5 本报记者 王雪敏;缺血性心肌病:外科医生能做什么[N];医药经济报;2010年
6 张中桥;卵巢癌诊治新进展[N];大众卫生报;2000年
7 通讯员 钱勇 记者 范又;我国成功重建永生化人脐静脉内皮细胞[N];光明日报;2003年
8 记者 傅冬红;甲基转移酶活性增高是急性白血病高发现象[N];健康报;2001年
9 冯琳;我国毛囊生长调控研究步入国际先进水平[N];中国医药报;2001年
10 言诚;青蒿素作用机制 研究获重大突破[N];医药经济报;2003年
中国知网广告投放
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978