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汉防己甲素对人神经母细胞瘤株细胞周期的影响

李巍松  施诚仁  王忠荣  
【摘要】:【目的】汉防己甲素(Tetrandrine,TET),又称粉防己碱,是从中草药汉防己的根块中提取的双苄基异喹啉类生物碱,是汉防己的主要有效成分。早期研究表明 TET 具有消炎、抗纤维化、镇痛、降压等广泛的药理作用。数十年来临床用于治疗关节炎、矽肺等疾病。近年研究还证实,其具有抗肿瘤作用,在体外培养中抑制多种肿瘤细胞,但对于人神经母细胞瘤的作用未见报导。本研究选取人神经母细胞瘤细胞株 TGW 体外培养,通过 TET 处理来探讨其用于治疗神经母细胞瘤的可能性,并探索其对神经母细胞瘤细胞 TGW 作用的机理。【方法】本研究以不同浓度的 TET 作用于人神经母细胞瘤细胞株 TGW 24及48小时,利用 MTT 方法检测肿瘤细胞增殖的影响;利用流式细胞仪检测肿瘤细胞细胞周期的变化,实时荧光定量 PCR 检测细胞周期抑制基因P15、P16、P21的表达变化。【结果】 1.TET 对肿瘤细胞株生长的抑制台盼兰和 MTT 实验显示,在25μmol/ L~0.5μmol/L 浓度下孵育24小时、48小时,TET 能明显抑制肿瘤细胞的生长。 25μmol/L TET 对细胞的活力均有明显抑制作用。48小时各浓度(25μmol/L~ 0.5μmol/L)对肿瘤细胞均有不同程度的抑制作用,其对肿瘤细胞的抑制作用呈现时间和剂量依赖性关系。2.TET 诱导细胞周期的变化 TET 能诱导肿瘤细胞 TGW 的周期发生变化,TET 使肿瘤细胞株的细胞周期阻滞于 G0/G1期,在 10μmol/L 浓度孵育24小时后,即可观察到该现象,25μmol/L 浓度孵育24小时后出现明显的凋亡峰。3.TET 诱导肿瘤细胞细胞周期抑制相关基因的变化实时定量 RT-PCR 发现10μmol/L TET 处理24小时后能使 TGW 细胞 P15、P16、P21 基因 mRNA 转录水平明显上调。【结论】 TET 在一定浓度范围下能明显抑制 TGW 细胞的增殖和活力,10μmol/L 浓度处理后 TGW 细胞后,细胞周期阻滞于 G0/G1期,其机制可能在于 TET 可造成 TGW 细胞周期抑制相关基因 P15、P16 及 P21表达增加,通过上调细胞周期抑制基因,从而造成对肿瘤周期的抑制。

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