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低温对幽门螺杆菌基因表达的影响

韩跃华  刘文忠  史耀舟  卢莉琼  赵国屏  杜勤  蔡建庭  钱可大  
【摘要】:正目的研究低温刺激所导致的H.pylori基因组表达谱的改变情况,阐明H.pylori在不利生长条件下的生存机制,揭示与其生长代谢和毒力密切相关的基因型。材料和方法分别在对数生长中期和静止期将37℃下液体培养的H.pylori转于20℃微氧条件下继续振荡培养。以转于低温前的菌液作为参照标本,转于20℃后15min、30min、60min、90min和 120min的菌液作为试验标本。重复进行生物学试验一次。采用随机九聚体和SuperscriptⅡ进行 H.pylori RNA反转录标记。分别用Cy5和Cy3标记参照标本和试验标本,将等量探针混合后杂交于 H.pylori全基因组DNA芯片,完成芯片杂交过程。利用Genespring 6.1进行数据的标化处理和聚类分析。数据分析的判断标准是标化后Cy3/Cy5(R/G)≤0.5者为表达下调的基因,R/G≥2者为表达上调的基因。选取2次生物学重复之间有重叠的数据进行分析,并采用荧光定量PCR验证芯片结果。

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