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重组人胸腺肽α1多基因串联融合表达载体的构建

金明飞  刘坚  马骁骏  汪洋  张绪瑛  吴自荣  
【摘要】:本文利用同尾酶技术,采用基因串联的方式,将胸腺肽α1基因经过逐串增加的方式,串联在表达载体pET-32a的硫氧还蛋白和纯化标签his基因之后,多次重复(EK-Tα1-Gly)n,成功构建了含有1- 4个胸腺肽α1基因的系列表达载体pET32a-NS1Tα1-pET32a-NS4 Tα1,得到了与分别表达融合有1 -4个胸腺肽α1融合蛋白相对应的系列基因工程菌E.coli BLR(DE3)(pET32a-NS1Tα1)-E.coli BLR(DE3)(pET32a-NS4Tα1)。分别对系列工程菌的诱导时间、诱导时菌体浓度、菌体收获时间等方面作了细致研究,采用SDS-PAGE检测并用凝胶成像分析软件分析比较了在最佳表达条件下各串工程菌表达量的差异,并对融合蛋白的裂解条件和初步的纯化工艺进行研究。研究发现3,4串工程菌较1,2串工程菌融合蛋白表达量有所提高,胸腺肽α1的相对含量明显增加,一次亲和层析即可获得融合蛋白。本章获得的1-4串工程菌均以可融性方式表达融合蛋白,且融合蛋白中胸腺肽α1的比重逐渐增加,增强了目的蛋白的表达。利用EK和羟胺位点,使纯化工艺相对比较廉价,为胸腺肽α1的规模化生产提供了基因工程菌和初步的纯化工艺。

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