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《华东六省一市生物化学与分子生物学学会2006年学术交流会论文集》2006年
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ADH2等位基因缺失的酿酒酵母杂合子的构建

郭晓贤  宋浩雷  江贤章  黄建忠  
【摘要】:燃料乙醇是替代石油的理想生物质可再生能源。酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)是燃料乙醇发酵生产的主要菌种。在酿酒酵母中有五个基因ADH1-ADH5编码与乙醇代谢相关的乙醇脱氢酶,其中的四种乙醇脱氢酶Adh1p、Adh3p、Adh4p和Adh5p在葡萄糖发酵过程中还原乙醛生产乙醇,而 Adh2p则催化相反的反应将乙醇氧化为乙醛。因此,阻断Adh2p催化的乙醇分解代谢支路是极有可能提高酿酒酵母合成乙醇的能力。为构建乙醇脱氢酶2(ADH2)等位基因缺失的酿酒酵母菌株设计一对嵌合引物通过PCR从pUG6质粒中扩增赋予G418抗性的异源显性Kanr标记产生ADH2基因破坏序列组件。将这个序列组件转化双倍体酵母菌株通过同源重组由loxP-KanMX-loxP替换其中的一个 ADH2产生kan+转化子。转化子首先在含G418的YEPD平板上筛选后进一步用菌落PCR验证。最终获得了一株缺失一个ADH2等位基因的遗传稳定杂合子菌株。在引入的抗性基因两端的loxP序列可以在Cre重组酶的作用下介导抗性基因的有效切除,实现抗性基因的重复利用。

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