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家蚕精氨酸激酶基因的克隆、基因结构与表达分析

王华兵  徐豫松  
【摘要】:精氨酸激酶是无脊椎动物体内主要的磷酸原激酶,对于无脊椎动物体内的能量代谢具有重要的调节作用。本文通过分析家蚕EST,利用RACE方法克隆了家蚕精氨酸激酶基因,命名为BmAK(Bombyx mori arginine kinase)基因,GenBank登录号为 DQ272299。BmAK cDNA全长为1268bp,编码355个氨基酸。氨基酸序列比较分析表明, BmAK与其他物种的精氨酸激酶具有相同的酶活性部位氨基酸序列和酶活性中心位点氨基酸(Cys270),以及对精氨酸激酶活性起重要作用的离子偶结构氨基酸(Asp61和 Arg192)。BmAK基因组结构分析表明:该基因由2个外显子和1个内含子组成: 5’调控序列存在HSF、BRCZ、E74A、HB、FTZ、DFD、ZESTE、TLL、STAT、PRD-HD等多个潜在转录因子结合位点,但没有典型的TATA盒启动子序列。Northern印迹和半定量 RT-PCR分析表明,BmAK基因的表达在不同组织和不同发育时期存在明显差异。幼虫期,BmAK基因在腹足中表达量最高,在代谢活性强的脂肪体中表达量次之,而在中肠、表皮和丝腺中表达量相对较弱;BmAK基因表达随发育时期不同而发生变化, 转录因子结合位点和发育表达模式分析表明,BmAK基因的表达可能受蜕皮激素调控。

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