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《2005年华东植物病理学术研讨会论文集》2005年
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农杆菌介导的黄瓜炭疽菌遗传转化

方丽  宋凤鸣  
【摘要】:建立并优化了农杆菌介导转化瓜类炭疽菌获得T-DNA插入突变体的体系, 包括农杆菌使用浓度、农杆菌与炭疽菌孢子共培养时间、抗生素配合使用抑制农杆菌污染等。所用的转化载体pBIG2RHPH2-GUS-GFP除了抗生素选择标记外还携带有融合GFP-GUS报告基因。转化106个孢予平均可获得约150-200个潮霉素抗性转化子。PCR检测表明,所有潮霉素抗性转化子菌株都能从其基因组DNA中扩增到转化载体中的GUS基因片段,而且都能产生GFP荧光或GUS染色阳性。转化子菌株经过连续继代培养后仍然稳定。随机对36转化子菌株进行致病性测定,发现1个转化子菌株对黄瓜致病性下降,1个丧失致病性,而大多数表现为野生型致病性。农杆菌介导转化瓜类炭疽菌体系的建立,为进一步构建大库容量的T-DNA 插入突变体库、致病性突变体筛选以及致病性相关基因的克隆鉴定奠定了基础。
【作者单位】:浙江大学生物技术研究所 浙江大学生物技术研究所
【分类号】:S436.421.1

【共引文献】
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