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《第二届浙江中西部科技论坛论文集第七卷(药学分卷Ⅱ)》2005年
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油菜花粉中槲皮素和山柰素总含量的HPLC法测定

郑珺  孙兰香  王紫秋  雷凯琴  
【摘要】:目的:建立油菜花粉中槲皮素与山柰素总含量的HPLC法的测定方法。油菜花粉(BeeP- ollenofBrassicaCampestrisL.鉴定人:浙江省药品检验所中药室主任祝明老师)为康恩贝公司新产品原料之一,文献报道:黄酮类是花粉中的药效成分,黄酮类化合物检测方法有快速比色法、分光先度法、HPLC法,经比较我们选用HPLC法;方法:以HPLC法定量分析山柰素、槲皮素总含量。色谱条件:色谱柱:EclipseXDB—C8(4.6mm×150mm,5μm),流动相:甲醇-0.4%磷酸溶液(50:50),检测波长:360nm,流速:1.0mL.min-1,进样量:10μL,以峰面积外标法定量。结果: 山柰素与槲皮素的峰与其它色谱峰分离良好,槲皮素在进样量(0.029—0.73μg)、山柰素在进样量 (0.053—1.315μg)的范围内,线性关系良好,回归方程分别为:槲皮素线性方程Y=3727.7X-6.0 相关系数r=0.9999;山柰素线性方程Y=3932.6X+3.5相关系数r=0.9999。槲皮素平均回收率为99.7%,RSD=1.6%,山柰素平均回收率为99.7%,RSD=2.0%,水解条件的选择考虑到样品本身含量较低且槲皮素和山柰素在高温高酸下易分解氧化,我们以回流时间、回流温度、酸度为因子作L9(34)正交试验,试验结果表明:温度为显著因子,酸度、回流时间为不显著因子,80℃最有利水解。因此我们采用了较缓和的条件:酸度选用25%盐酸-甲醇(1:6),回流温度选用80℃, 时间为30min。稳定性试验槲皮素含量RSD为0.8%,山柰素含量RSD为1.0%,表明供试品溶液在24h内稳定。色谱柱的选择C18柱是最为常用的色谱拄,但经我们多次试验发现,C8柱对油菜花粉中的槲皮素和山柰素有特殊的分离效果,在不影响分离效果下,主峰保留时间由原来的近 20分钟下降到不足8分钟,大大提高工作效率。山柰素的最大吸收在366.1nm;槲皮素的最大吸收在371.1nm,因此检测波长选用360nm。结论:本方法结果准确,重现性好,可以作为花粉中黄嗣含量的定量分析方法。

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