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两种新型肠毒素SEG、SEI的融合表达、纯化及活性研究

李丹曦  潘映秋  丁丁  孙红颖  陈枢青  
【摘要】:目的克隆金黄色葡萄球菌肠毒素SEG与SEI全长基因,构建SEG与SEI的GST融合表达载体,实现其可溶性表达,并对纯化的重组SEG-GST与SEI-GST融合蛋白的生物学活性进行研究.方法通过聚合酶链式反应(Polymerase chain reaction,PCR)从金黄色葡萄球菌标准产毒菌株基因组中得到肠毒素SEG与SEI的基因,将其克隆至融合表达载体pGEX-4T-1,转化大肠杆菌进行表达并对融合蛋白进行亲和层析纯化.通过重组的融合蛋白SEG-GST与SEI-GST对淋巴细胞的增殖作用及其对肿瘤细胞杀伤活性的影响,对其进行生物学活性进行研究.结果得到正确的肠毒素SEG与SEI基因序列并得到高效表达的融合蛋白,MTT法结果表明重组的融合蛋白SEG-GST与 SEI-GST均表现出良好的促淋巴细胞增殖能力,并且能够增强淋巴细胞对肿瘤细胞的杀伤活性.结论本实验成功克隆了SEG与SEI基因,表达并纯化出具有抗肿瘤生物学活性的重组SEG-GST与 SEI-GST融合蛋白,为进一步对其在抗肿瘤方面的应用研究奠定了基础.

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