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《首届长三角科技论坛——长三角生物医药发展论坛论文集》2004年
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人脑源性神经营养因子成熟肽基因克隆及表达

张虎  杨吉成  盛伟华  缪竞诚  李丽娥  王金志  白艳艳  谢宇锋  
【摘要】:目的:构建表达人脑源性神经营养因子的基因工程菌。方法:人工合成一对含EcoRI 和BamHI 限制性酶切位点的特异引物,以健康成人末梢白细胞基因组DNA 作为模板。应用PCR 技术扩增hBDNF 成熟肽基因,用A-T 克隆法与pUCm-T 载体连接,pUCm-T-BDNF克隆片段再定向插入原核表达载体PBV220,构建的重组体PBV220-BDNF 转化大肠杆菌DH5a 经热诱导表达。结果:经DNA 测序和限制性酶切确证重组人载体片段为目的基因的核苷酸序列,并成功表达蛋白。结论:本研究成功地克隆出haBDNF 基因编码序列并在大肠杆菌中获得稳定表达,为今后的生物学活性和神经系统的基因治疗奠定了基础

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