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《首届长三角科技论坛——长三角生物医药发展论坛论文集》2004年
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人Epsilon干扰素(hIFN-ε)的基因克隆和表达

马丽丽  盛伟华  谢宇锋  缪竞诚  王金志  庄文卓  李丽娥  杨吉成  
【摘要】:目的:构建表达hIFN-ε基因的真核表达载体,并在COS-7细胞中表达具有抗病毒活性的rhIFN-ε蛋白。方法:用TNFα刺激HeLa 人宫颈癌细胞,抽提总RNA,经PT-PCR 获得全长cDNA,与pcDNA3.1/myc-his(-)A 真核表达载体连接,构建重组体pcDNA3.1A-hIFN-ε,并在COS-7细胞中进行表达,采用微量细胞病变抑制试验研究表达产物的抗病毒活性。结果:经PCR 和限制性酶切鉴定以及DNA 测序确证重组入载体中的基因片段不仅方向正确,而且确为hIFN-ε,与GeneBank 报告序列完全一致,并成功地在COS-7细胞中瞬时表达了具有抗病毒活性的rhIFN-ε蛋白。结论:本研究成功地克隆出hlFN-ε基因编码序列并在COS-7细胞中获得瞬时表达,证明了rhIFN-ε蛋白具有抗病毒活性,为今后干扰素的基因重组药物研制奠定了基础。

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