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《第九次全国神经病学学术大会论文汇编》2006年
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实验性自身免疫性脑脊髓炎脑内I2R受体密度变化初步观察

殷为勇  郑荣远  朱振国  邱伟文  潘建春  李云峰  高燕  
【摘要】:目的:研究实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)脑内12R受体密度和亲和力的变化。方法:1.EAE模型的诱导: 采用豚鼠脊髓匀浆与完全弗氏佐剂制成抗原乳剂诱导EAE组8只Wister大鼠,对照组6只(注射等量生理盐水加完全弗氏佐剂)。免疫后所有动物每日称体重并进行神经症状评分。根据Matthaei等人的神经症状评分标准加以修改,设定为0-8 分的评分法。2.受体膜成分制备:在EAE在发病高峰时全部大鼠断头取脑,加入匀浆液电动搅匀。冰浴匀浆,离心弃上清液,重复清洗,加定量反应液使沉淀蛋白重新悬浮,用考马斯亮蓝G-250法测定每管中蛋白浓度并稀释,-70℃分装保存备用。3.放射性受体-配体饱和实验:总反应体积0.25ml,反应液中含去甲肾上腺素以封闭α2-肾上腺素受体。受体膜蛋白 100μg/管加入[3H]Idazoxan(终浓度1.25-40nmol/L)标记I2R,非特异结合管加入色拉唑啉,所有管均用反应液补足至终体积250μl。经孵育、冰浴终止反应、样品收集器用纤维滤纸负压抽滤、反应液冲洗3次,分离游离配体和结合配体。滤纸烤干, 加入闪烁液,隔夜用β-放射线液闪计数仪记录放射强度,检测EAE大鼠脑内I2R受体密度和亲和力变化。特异结合量=总结合量-非特异结合量,每一结合点均采用双管。取二者的均数作为实验终数据。结果:EAE组于免疫后第15天开始发病, 发病率为7/8,EAE组的最大症状评分3.71±1.38。潜伏期为16.29±1.11(d)。EAE组大鼠脑组织咪唑啉I2R受体的解离常数 (Kd)和最大受体数量(Bmax)值分别是23.66±2.63nM和289.5±24.3fmol/mg蛋白(n=3);对照组脑咪唑啉受体的Kd和 Bmax值分别是21.81±8.631nM和171±40.56fmol/mg蛋白(n=3)。受体最大结合数量EAE组明显上调74.5%(n=3,P 0.05),而受体解离常数(亲和力)两组差异无统计学意义。结论:I2R在EAE大鼠脑组织中受体密度上调。可能与EAE发病有联系。

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