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《第五届全国肝脏疾病临床暨中华肝脏病杂志成立十周年学术会议论文汇编》2006年
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HBV RNA上La protein结合位点的缺失对自身稳定性的影响

林园园  林菊生  王晓燕  谢娜  周秀敏  宋宇虎  
【摘要】:目的研究乙型肝炎病毒(HBV)DNA上的突变所造成HBV RNA上La protein结合位点的缺失对HBV RNA 在宿丰细胞内稳定性的影响,评价HBV DNA上这个位点对HBV生命周期的重要性,从而寻找新的抗HBV靶点。方法应用 PCR,分子克隆和定点突变技术,针对La protein与HBV RNA结合的相关位点,构建缺失了La protein结合相关位点的HBV 突变载体,命名为pHBV-mLa;通过计算机预测突变后,这段序列所在的HBV RNA片段的二级结构;应用脂质体将未突变的 HBV载体和HBV突变载体分别瞬时转染入HepG2细胞株中;半定量RT-PCR检测HBsAg mRNA和HBeAg mRNA,ELISA 检测HBsAg和HBeAg表达情况。结果酶切鉴定和碱基测序证明,成功构建了La protein结合相关位点部分碱基缺失的HBV 突变载体——pHBV-mLa;突变后的HBV RNA二级结构同突变前的比较,完全改变;转染后半定量RT-PCR检测,发现突变后HBV HBsAg mRNA和HBeAg mRNA水平均明显降低,ELISA检测发现突变引起HBsAg和HBeAg表达下调。结论由于HBV DNA上的人工突变,所引起的HBV RNA上La protein结合位点相应的改变,使得HBV RNA特殊的二级结构改变, 导致La protein与HBV RNA结合松弛、解离,无法保护HBV RNA(HBsAg mRNA和HBeAg mRNA),RNA酶就可以引起 HBV RNA的降解,从而使HBV RNA水平降低,影响HBV各种蛋白的表达。本实验表明,在HBV DNA上,这个位点碱基序列的保守性使HBV RNA可以形成特殊的二级结构,这个结构影响着HBV RNA在宿主细胞内的稳定性,所以HBV DNA 上这个位点的存在和保守对HBV生命周期至关重要。

【参考文献】
中国期刊全文数据库 前1条
1 傅磊,吴雪,孔玉英,汪垣;乙型肝炎病毒核心启动子及其上游顺序对其基因表达的调控[J];病毒学报;1997年03期
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前4条
1 彭劼,骆抗先,林裕龙,侯金林,郭亚兵,王战会;HBV核心启动子部分缺失重组质粒的构建[J];第一军医大学学报;2001年11期
2 彭劼,骆抗先,侯金林,郭亚兵,王战会;乙型肝炎病毒核心启动子缺失变异对病毒抗原表达的影响[J];第一军医大学学报;2002年04期
3 成萍,尤忠胜,孔玉英,汪垣;乙型肝炎病毒的核心启动子各区段功能的研究[J];生物化学与生物物理学报;1999年05期
4 彭劼,骆抗先,侯金林,郭亚兵,王战会;核心启动子部分缺失的乙型肝炎病毒基因的真核克隆及其意义[J];中华传染病杂志;2002年03期
中国博士学位论文全文数据库 前4条
1 彭劼;HBeAg阴性HBV感染的一些临床与分子病毒学问题[D];第一军医大学;2002年
2 孙剑;拉米夫定耐药患者的临床特点及耐药毒株的分子病毒学研究[D];中国人民解放军第一军医大学;2003年
3 吴涛;终末期肝病患者肝组织和血清中乙型肝炎病毒转录体的对照研究[D];第四军医大学;2004年
4 徐振华;X蛋白与p73对乙肝病毒转录复制的影响和肝癌相关新基因HCRP1的克隆与功能研究[D];中国科学院研究生院(上海生命科学研究院);2004年
中国硕士学位论文全文数据库 前2条
1 安小平;HBV和HIV假病毒载体系统的初步研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2007年
2 林园园;乙型肝炎病毒RNA上La protein结合位点的缺失对其自身稳定性影响的实验研究[D];华中科技大学;2006年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前1条
1 甘人宝,储美瑾,沈绿萍,钱苏雯,李载平;克隆的adr亚型乙型肝炎病毒(pADR-1)DNA的全顺序[J];中国科学B辑;1986年01期
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 宋骏;夏长胜;;皖南地区乙型肝炎病毒基因型和亚型的分布特征[J];皖南医学院学报;2011年04期
2 ;[J];;年期
3 ;[J];;年期
4 ;[J];;年期
5 ;[J];;年期
6 ;[J];;年期
7 ;[J];;年期
8 ;[J];;年期
9 ;[J];;年期
10 ;[J];;年期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 陈欣如;侯岩岩;燕顺生;;肝炎病毒动物模型的研究进展[A];中国实验动物学会第六届学术年会论文集[C];2004年
2 吴志强;熊焰;;乙型肝炎病毒荧光定量检测与其血清标志物检测结果的相关性研究[A];第6次全国微生物学与免疫学大会论文摘要汇编[C];2004年
3 冯育会;;浅谈肝炎病毒的致病特点[A];贵州省中西医结合学会中医诊断现代研究论文汇编[C];2007年
4 谭太昌;;HBsAg和HbcAb阳性患者血清前S1抗原检测的临床意义[A];第6次全国微生物学与免疫学大会论文摘要汇编[C];2004年
5 苏海霞;闫永平;徐德忠;李端;卢娟;;乙型肝炎病毒前C/C和前S/S基因异质性及其与宫内感染关系的初步研究[A];全面建设小康社会:中国科技工作者的历史责任——中国科协2003年学术年会论文集(下)[C];2003年
6 郭振兴;季林祥;杨仁池;;干扰素治疗肝炎病毒相关性血小板减少[A];第十一届全国血栓与止血学术会议暨血栓栓塞性疾病(血栓与止血)基础与临床研究进展学习班论文摘要汇编及学习班讲义[C];2007年
7 赵振爱;;病毒性肝病的中医用药思路[A];中医药优秀论文选(下)[C];2009年
8 黄育华;盛国光;张建军;;海珠益肝胶囊的抗乙型肝炎病毒作用疗效观察[A];2002全国中西医结合肝病学术会议论文汇编[C];2002年
9 孟建中;;透析病人肝炎病毒重叠感染的问题[A];中华医学会肾脏学分会2004年年会暨第二届全国中青年肾脏病学术会议专题讲座汇编[C];2004年
10 王鸣;余育胜;周建平;雷文兰;张莉;;咸宁烟厂工人乙型肝炎抗原抗体系统检测结果分析[A];生命科学与微生物专辑[C];2004年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 徐超;专家提出肝炎病毒检测新见解[N];科技日报;2010年
2 本报记者 李健 健文;专家指出文身和穿耳洞是潜在的肝炎病毒传播途径[N];中国消费者报;2010年
3 张孟军;美将两种肝炎病毒列为致癌物[N];科技日报;2005年
4 白庭;肝炎病毒的空气中能存活多久[N];农村医药报(汉);2007年
5 王有国;肝炎病毒争霸[N];家庭医生报;2006年
6 王有国;肝炎病毒争霸[N];家庭医生报;2006年
7 周华英;新肝炎病毒可经宫内母婴传播[N];大众卫生报;2002年
8 佘峥李静 顾影;国际顶尖科学家在厦向肝炎病毒宣战[N];厦门日报;2008年
9 蔡晧东;酒精是肝炎病毒的“帮凶”[N];家庭医生报;2005年
10 本报驻东京记者 张超;记录频刷:日本送别“新”的一年[N];法制日报;2010年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 王宏卫;庚型肝炎病毒生物学特性及其与丙型肝炎病毒的比较研究[D];第二军医大学;2003年
2 阎瑾琦;丙型肝炎病毒重组复合表位抗原的免疫原性研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2003年
3 赵伟;病毒性肝炎基因芯片诊断技术研究和临床应用[D];南京农业大学;2004年
4 陆荫英;乙型肝炎病毒相互作用蛋白编码基因的克隆化及新基因功能的初步研究[D];中国人民解放军军医进修学院;2003年
5 刘晶;丙型肝炎病毒被膜蛋白的表达、纯化与应用研究[D];中国科学院研究生院(上海生命科学研究院);2002年
6 梁雪松;IRES特异性抑制性RNA阻断丙型肝炎病毒基因表达的研究[D];中国人民解放军第四军医大学;2003年
7 毛红霞;丙型肝炎病毒不同基因亚型NS3蛋白酶比较及相关细胞蛋白的筛选[D];复旦大学;2003年
8 王怡;RDA技术分析病毒性肝硬化、原发性肝细胞癌相关基因的研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2004年
9 王刚;HBV感染HepG2细胞早期过程研究[D];山东大学;2005年
10 胡卫江;庚型肝炎病毒转基因小鼠模型的建立及其特性研究[D];第二军医大学;2001年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 关岚;男性吸毒人群中丙型肝炎病毒感染状况及其影响因素的研究[D];中南大学;2003年
2 苏小平;乙型肝炎病毒preS2-S基因(adr亚型)转基因小鼠的建立[D];第二军医大学;2003年
3 葛军辉;乙型肝炎病毒变异型s基因疫苗逆转转基因小鼠免疫耐受的研究[D];第二军医大学;2003年
4 贺启贵;门脉高压性胃病病理初步分析[D];山西医科大学;2003年
5 韩香子;延边地区庚型肝炎病毒感染状况的研究[D];延边大学;2001年
6 张胜权;N-乙酰半胱氨酸(NAC)抗乙肝病毒(HBV)作用[D];安徽医科大学;2001年
7 赵书民;乙型肝炎病毒pres_2-s基因(ayw亚型)转基因小鼠的建立[D];第二军医大学;2002年
8 孙利;丙型肝炎病毒DNA疫苗的实验研究[D];中国人民解放军第四军医大学;2003年
9 彭翼飞;限制性显示PCR技术在丙型肝炎病毒基因芯片制备中的应用[D];第一军医大学;2001年
10 张伟;乙型肝炎病毒前S区不同片段的克隆、鉴定及与PreS1基因相互作用蛋白在酵母双杂交系统中的筛选[D];第四军医大学;2002年
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