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《全国心脏瓣膜外科学术会议论文集》2005年
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混合醇改性对减轻戊二醛牛心包对人体细胞毒性的影响

吴国伟  龚光甫  
【摘要】:目的研究混合醇改性对戊二醛牛心包细胞毒性的影响;并验证0.3%戊二醛保存对改性后的戊二醛牛心包细胞毒性有无影响。方法取新鲜牛心包心前区部分,分三组处理:A组:用0.625%戊二醛固定两周后用0.3%戊二醛保存;B组:牛心包用0.625%戊二醛固定二周后,用混合醇后处理并保存;C组:将B组心包在混合醇中处理2个月后,转入0.3%戊二醛中保存。D组:用玻片作为对照组。将三种心包切成同样大小(2×2cm2),用生理盐水分别漂洗10 分钟3次。然后分别种植同样数目的(4×104)人胚肺成纤维细胞,培养7天后,将细胞洗下来,0.4%台盼兰染色,计算每片心包上的活细胞数。同时对心包片细胞作光镜及扫描电镜(SEM)观察。结果 1.四个组活细胞计数结果:三组心包片上的活细胞数分别为:A组(戊二醛牛心包):(5.83±2.04)×103;B组(混合醇改性戊二醛牛心包):(16.67± 2.04)×103;C组(0.3%戊二醛保存的混合醇改性牛心包):(18.75±1.12)×103。与对照组[(176.25±18.15)×103] 相比,三种心包均对细胞增殖有不同程度的抑制。混合醇改性后(B、C组)与未改性戊二醛牛心包(A组)的活细胞数有显著性差异(P0.001),而B组与C组无显著性差异(P0.05)。2.光镜细胞形态学观察:对照组细胞生长良好,且形态正常,无死亡细胞。细胞计数时见A、B、C三组均有死亡细胞,尤以A组最多。3.扫描电镜观察:A组细胞较少, 且多为圆球形细胞,大部分为裸露的胶原纤维;B、C组均有较多的细胞覆盖生长,细胞展开,可见细胞分裂相。讨论戊二醛作为常用的鞣制剂,与生物材料的钙化衰坏关系密切。戊二醛处理的生物瓣植入人体后,其分解产生的游离醛基易成为钙化的中心;游离醛基有明显的细胞毒性,影响宿主内皮细胞覆盖生长,亦使生物瓣容易钙化。本实验在三种不同处理的牛心包上培养人胚肺成纤维细胞,结果发现用混合醇改性后的戊二醛牛心包细胞毒性明显降低,而且改性后的戊二醛牛心包重新放入0.3%戊二醛保存对其细胞毒性没有显著影响。用混合醇改性戊二醛牛心包,混合醇可使醛基封闭,形成稳定的环状结构。它可能的机制是化学阻断醛基后形成内聚结构,与以往Shiciff碱结构中的碳氮双键(C= N)不同,因该反应做功、放能,内聚结构一经形成,不易水解,结构相对长期稳定,去除阻断剂后,逆转缓慢。结论 1.经混合醇处理后的戊二醛牛心包细胞毒性明显降低,但仍有细胞毒性。2.混合醇改性后的戊二醛牛心包保存在 0.3%戊二醛溶液中,其细胞毒性无明显改变。

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