腺病毒介导TIMP-4基因转染对大鼠血管平滑肌细胞迁移的影响

【摘要】：目的本实验拟构建携带TIMP-4基因的重组腺病毒载体,通过转染体外培养的大鼠VSMC,研究增强其表达对VSMC迁移的影响。方法选用位置特异性构建系统构建携带TIMP-4基因的重组腺病毒载体Ad.TIMP-4转染至培养大鼠VSMC,以免疫细胞化学法、RT-PCR、蛋白免疫杂交检测转染基因的表达。酶谱法及逆向酶谱法检测表达蛋白活性。实验分为未转染组、未转染+PDGF组、Ad.TIMP-4转染+PDGF组、Ad.LacZ转染+PDGF组。Ad.TIMP-4转染组和Ad.LacZ转染组时相点设12h、1d、2d、4d、6d,未转染组与未转染+PDGF组只作无血清培养1d。实验中将配制好的Matrigel基底膜基质涂抹于Millicell培养小室微孔膜上,厚度约0.5mm,室温下静置使Matrigel胶化。计数方法在显微镜下计数5个高倍视野的全部细胞,取三次重复实验细胞迁移数的平均值为相应时相点的迁移细胞数。结果对照组VSMC在元PDGF趋化刺激时,几乎不能通过铺于Millicell膜上的Matrigel基底膜基质。而在培养液中PDGF趋化刺激下,VSMC能穿过铺于Matrigel基底膜基质,从膜的上方移动到下方。在培养液中PDGF趋化刺激下,各检测时相点Ad.TIMP-4转染组VSMC迁移数较未转染组和Ad.LacZ转染组显著减少,并且随转染时间的延长,TIMP-4表达增多,迁移的VSMC数呈更加减少的趋势,VSMC迁移数最大减少78.7%。结论Ad.TIMP-4转染使VSMC表达TIMP-4增强,通过抑制MMPs过高的活性,维持ECM稳态,减少了有丝分裂原刺激所引起的VSMC迁移,且这种抑制作用存在量效关系,从而进一步明确了TIMP-4的生物学活动。

【作者单位】：第三军医大学西南医院心血管内科重庆市介入心脏病学研究所第三军医大学西南医院心血管内科重庆市介入心脏病学研究所第三军医大学西南医院心血管内科重庆市介入心脏病学研究所第三军医大学西南医院心血管内科重庆市介入心脏病学研究所第三军医大学西南医院心血管内科重庆市介入心脏病学研究所第三军医大学西南医院心血管内科重庆市介入心脏病学研究所
【分类号】：R543

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