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《中华医学会心血管病分会第八次全国心血管病学术会议汇编》2004年
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腺病毒介导TIMP-4基因转染对大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响

钟理  何国祥  李德  冉擘力  景涛  唐波  
【摘要】:目的目前关于TIMP-4生物学功能的研究报道较少,对血管平滑肌细胞生物学行为的影响尚不明确。本实验拟构建携带TIMP-4基因的重组腺病毒载体,通过转染体外培养的大鼠VSMC,研究增强其表达对VSMC增殖的影响。方法选用位置特异性构建系统构建携带TIMP-4基因的重组腺病毒载体Ad.TIMP-4通过组织块贴壁法原代培养大鼠VSMC;用Ad.TIMP-4转染至培养VSMC,以免疫细胞化学法、RT-PCR、蛋白免疫杂交检测转染基因的表达。酶谱法及逆向酶谱法检测表达蛋白活性,MTT比色法、3H-TdR掺入法检测细胞DNA合成、流式细胞仪检测VSMC增殖周期。结果正常培养VSMC不表达TIMP-4,转染后TIMP-4表达水平随转染时间延长逐渐增高,至2天后达高峰。培养VSMC在转染Ad.TIMP-4后成功表达TIMP-4,且表达水平随转染时间延长逐渐增高,酶谱法及逆向酶谱法均证实其抑制MMP的活性。Ad.TIMP-4转染组吸光度较未转染组和Ad.LacZ转染组显著降低,且随着转染时间的延长,TIMP-4表达量增高,吸光度降低的趋势随转染时间延长而增大,吸光度降低最大达47.1%。Ad.TIMP-4转染组VSMC的3H-TdR掺入量较未转染组和Ad.LacZ转染组显著降低,且随着转染时间的延长,TIMP-4表达量增高,VSMC的3H-TdR掺入量降低的趋势随转染时间延长而增大,掺入量降低最大达30.7%。对数生长期检测周期各时相所占比例发现,Ad.TIMP-4转染组的G0-G1期VSMC比率较未转染组和Ad.LacZ转染组显著增高,G2-M期和S期细胞比率显著降低。结论Ad.TIMP-4转染使VSMC表达TIMP-4增强,抑制了VSMC的增殖,从而进一步明确了TIMP-4的生物学活动。TIMP-4基因所介导的抑制VSMC增殖作用可能有利于减轻血管球囊损伤后新生内膜的形成,可望用于RS基因治疗研究。

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