狂犬病毒ERA株基质蛋白的原核表达、纯化及多克隆抗体的制备

【摘要】：应用PCR扩增狂犬病病毒ERA株的M基因,定向插入到原核表达载体pET-32a(+)中,把构建的重组质粒pET-M转化原核表达宿主菌株BL21(DE3),通过IPTG诱导和优化表达条件,在大肠杆菌获得高效表达。重组M蛋白主要以包涵体的形式表达,用含不同浓度尿素的包涵体洗涤液处理包涵体,纯化M蛋白,用纯化的M蛋白免疫小鼠制备多克隆抗体,经过Western blot和间接免疫荧光试验证实抗M蛋白的血清能特异地识别狂犬病病毒感染细胞中表达的M蛋白,为进一步研究狂犬病病毒M蛋白的功能奠定基础。