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《2005全国第二届核酸疫苗研讨会论文集》2005年
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乙肝病毒DNA疫苗双表达载体的构建

赵大鹏  刘丹  戚凤春  
【摘要】:为增强乙肝DNA疫苗免疫作用,我们将编码乙肝病毒表面抗原(HBs)基因、内部核糖体进入位点(IRES)基因、人白细胞介素2(IL-2)基因片段克隆到pVAX1质粒中,构建出乙肝DNA疫苗双表达载体。首先从基因工程乙肝疫苗CHO(C28)细胞中,提取含有HBs Ag基因的细胞染色体组DNA,通过PCR法扩增获得adr亚型的HBs基因。然后以pBV220/IL-2质粒为模板进行PCR扩增得到IL-2基因,以pIRES/neo质粒为模板进行PCR扩增,得到内部核糖体进入位点(IRES)基因。为使乙肝表面抗原基因HBs与细胞因子IL-2基因在同一载体内高效表达,用内核糖体进入位点(IRES)基因片段将二者连接,分别把这三段基因片段插入到pVAX1载体上,构建而成双表达载体pVAX/HBs IRES IL-2。我们把经过验证已正确插入到pVAX1载体上的质粒,称为p/HⅡ质粒。分别将构建的p/HⅡ质粒和pVAX1质粒在体外转染生长状态良好的COS7细胞,用常规方法培养C28细胞做阳性对照,并分别于24、48、72小时后取样检测。应用ELISA方法检测瞬时表达的结果表明,C28细胞及转染p/HⅡ质粒的细胞上清液中有明显乙肝病毒表面抗原的表达,而转染pVAX1质粒的细胞上清中未检测到乙肝病毒表面抗原表达。表明本实验构建的乙肝DNA疫苗可进一步用于免疫动物。

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