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《2005全国第二届核酸疫苗研讨会论文集》2005年
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DNA疫苗与亚单位疫苗联合免疫制备马抗SARS-CoV抗体IgG

王瑞琳  金宁一  赵博  金洪涛  贾雷立  金明兰  
【摘要】:SARS在全球的传播对人类健康和经济发展造成严重危害。2003年底SARS的传播已经被控制,但它可能一直在动物库中循环,随时都有可能再次暴发。而对于一种病毒性疾病,当前最有效的防治方法就是疫苗接种。但是一种疫苗的研制到临床往往需要几年,甚至十几年的时间,如果在这期间疾病暴发,后果不堪设想。所以寻找一种研制周期短,应用及时的防治方法显得尤为重要。其中,IgG的使用是最为直接而且有效的方式。马免疫球蛋白制品生产工艺相对成熟,且在历史上对传染性疾病的预防和治疗起到过积极的作用。本研究用DNA疫苗和亚单位疫苗的联合免疫制备治疗性免疫球蛋白。利用已构建的编码SARS-CoV核蛋白基因的重组质粒pET-28a-N在大肠杆菌中表达SARS核蛋白,对表达蛋白形成的包涵体进行洗涤,得到的蛋白纯度可达到70.1%,经切胶纯化后测量其浓度,其回收率为37%,保存备用。用预先构建好的DNA疫苗pIRES-CTL-N对马进行四次基础免疫,用纯化的蛋白加强免疫两次,每次免疫后测定抗体效价,根据抗体产生规律,第二次蛋白免疫后20d采血,大量采血后对血清抗体初步纯化,上层析柱进一步纯化,得到精致IgG。结果表明蛋白免疫后,马体产生的抗SARS抗体IgG滴度可达1:2560,核酸疫苗的剂量对抗体的产生有很大影响。血清经过层析纯化后,获得了精制的马SARS-CoV抗体IgG。

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