收藏本站
《2005全国第二届核酸疫苗研讨会论文集》2005年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

流式细胞技术在细胞免疫检测中的应用

金华利  康友敏  王宾  
【摘要】:利用流式细胞技术,结合荧光染料应用于免疫学检测,尤其是对细胞免疫反应水平的检测和评价。其中包括体外T淋巴细胞增殖、体外混合淋巴细胞反应、体外CTL及体内CTL检测等。1、体外淋巴细胞增殖:将核酸疫苗两次免疫纯系小鼠(如Balb/c)后7天,无菌条件下制备脾脏单细胞悬液,裂解红细胞、玻璃棉初步纯化、磁珠纯化得到T淋巴细胞,取其中107 T细胞经荧光染料CFSE(2.5 μmol/L)染色,分别用特异性抗原、非特异性抗原体外刺激T细胞1~3 d,流式细胞检测细胞荧光强度变化,计算其扩增情况;2、体外混合淋巴细胞反应:制备纯系小鼠(如Balb/c)的脾脏单细胞悬液并裂解红细胞,取其中107淋巴细胞经荧光染料CFSE(2.5 μmol/L)染色后,制备另一纯系小鼠(如C57)抗原提呈细胞(APC)为刺激细胞,丝裂酶素处理后与前者的淋巴细胞(106/孔)以不同的数量比于6孔细胞培养板共培养1-3 d,流式细胞检测前者淋巴细胞荧光强度的变化,计算其扩增情况;3、体外CTL:核酸疫苗两次免疫纯系小鼠(如Balb/c)后7 d,取小鼠脾脏或淋巴结处T细胞作为效应细胞,取SP2/0细胞作为靶细胞,以20 g抗原肽每106细胞的比例孵育1 h,然后用荧光燃料DIOC对靶细胞染色,并将其以同一浓度(4×105)置于细胞培养板,加入不同比例的效应细胞与靶细胞共培养4 h后,用荧光染料PI染色后用流式细胞检测双色荧光细胞的数量,并利用公式计算特异性杀伤率(特异杀伤率=[(%of target cell lysis in the test-0%of death)/(100%of death—0%of death)]×100;4、体内CTL:核酸疫苗两次免疫纯系小鼠(如Balb/c)后7天,取正常的同系小鼠脾脏细胞或淋巴结细胞作为靶细胞,以相同浓度(107)分为两群,分别利用荧光燃料CFSE高浓度(2.5μmol/L)和低浓度(0.25μmol/L)染色后,高浓度的细胞与特异性抗原肽孵育40min作为靶细胞,低浓度的细胞不孵育肽作为对照,将两群细胞混合后通过尾静脉注射到免疫小鼠的体内,4-16 h后,流式细胞检测脾脏和淋巴结处高荧光及低荧光细胞的比例.计算杀伤率(Ratio=(percentage CFSElow/percentageCFSEhigh).Percentage specific lysis=[(1-ratio unprimed/ratio primed)×100].)。

【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 李培锋;赵珍;关红;金少琳;;甘氨胆酸对小鼠免疫功能的影响[J];中国兽医杂志;2007年10期
2 李伟;徐镔蕊;王广秀;杜艳;;CD47分子在猪附红细胞体病溶血过程中的变化规律[J];中国预防兽医学报;2009年05期
3 戴志红;赵耘;宁宜宝;秦玉明;谢磊;张广川;范学政;王在时;张仲秋;;用三色间接流式细胞术检测猪外周血白细胞亚群[J];中国兽药杂志;2010年01期
4 戴华;郑佳玉;胡茂志;陈俊华;潘志明;焦新安;;抗鸡γ-干扰素单克隆抗体的研制及鉴定[J];扬州大学学报(农业与生命科学版);2007年04期
5 李奎;孙桂荣;康相涛;李春丽;刘英;刘忠虎;李明;王永才;;固始鸡免疫器官内细胞增殖动态变化[J];中国兽医学报;2008年08期
6 都惠中;魏海军;高庆华;韩春梅;赵伟刚;张志国;张云梅;;梅花鹿XY精子分选及冷冻精液制备[J];经济动物学报;2008年04期
7 李淑芳;李英;张继东;雍艳红;蔡康荣;谢为天;;米糠多糖对雏鸡T细胞免疫功能的影响[J];养禽与禽病防治;2009年03期
8 李奎;王永才;康相涛;刘忠虎;李春丽;李明;孙桂荣;刘英;;固始鸡免疫器官内T淋巴细胞亚群动态变化[J];中国兽医学报;2009年10期
9 王益兵;姚军虎;覃定奎;李朝云;杨小军;;肉仔鸡肠道B淋巴细胞Ca~(2+)浓度流式细胞术测定方法的建立[J];西北农林科技大学学报(自然科学版);2011年03期
10 屈雪琪;赵建增;梁智选;李勇;白雪;梅林;温涛;何斌;杨举;罗胜军;邢海云;高英杰;;流式细胞术检测不同试验条件对猪T淋巴细胞亚群的影响[J];中国畜牧兽医;2011年04期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 金华利;康友敏;王宾;;流式细胞技术在细胞免疫检测中的应用[A];2005全国第二届核酸疫苗研讨会论文集[C];2005年
2 徐鹏;赵权;杨桂连;门静涛;蔡亚南;姜晶;;仔猪人工感染猪囊尾蚴后外周血中淋巴细胞亚群的动态变化研究[A];中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第九次学术研讨会论文摘要集[C];2006年
3 梁萍;甘军纪;吴长新;吴艳涛;;鸡外周血淋巴细胞中马立克氏病疫苗病毒生产性感染的动态研究[A];第六届全国会员代表大学暨第11次学术研讨会论文集(下)[C];2005年
4 王纯洁;敖日格乐;斯日古楞;贾德刚;赵怀平;;鸡包涵体肝炎过程中血液免疫细胞变化规律的研究[A];中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第十四次学术研讨会、中国病理生理学会动物病理生理专业委员会第十三次学术研讨会论文集[C];2006年
5 李奎;孙桂荣;康相涛;李春丽;刘英;刘忠虎;李明;王永才;;固始鸡免疫器官内细胞增殖动态变化研究[A];中国畜牧兽医学会动物解剖学及组织胚胎学分会第十五次学术研讨会论文集[C];2008年
6 朱绍辉;吴延功;单虎;王志亮;孙承英;赵永刚;;猪附红细胞体荧光定量PCR检测方法的建立[A];中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第七次研讨会论文集[C];2008年
7 肖希龙;陈倩;靳溪;邹家杰;张婷;刘凤英;汤树生;;喹噁啉类药物遗传毒性和细胞毒性作用机理研究进展[A];中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十次研讨会论文摘要集[C];2009年
8 司兴奎;张济培;陈建红;顾万军;马春全;;猪圆环病毒2型感染对伪狂犬疫苗免疫应答的影响[A];中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第七届全国会员代表大会暨第十三次学术研讨会论文集(上册)[C];2009年
9 马学恩;Sylvain De Guise;;在体外有机氯化合物对小鼠淋巴细胞和中性粒细胞免疫影响的研究[A];中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第十一次兽医病理学、第十次动物病理生理学学术研讨会论文集[C];2001年
10 郝永新;李雪莲;陈丹;刘群;;弓形虫瞬时转染中不同启动子介导的双报告基因优化[A];第二届全国人畜共患病学术研讨会论文集[C];2008年
中国重要报纸全文数据库 前1条
1 本报记者 吴洣麓;陆阳清:新技术控制猪性别[N];北京科技报;2009年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 司兴奎;猪圆环病毒2型感染对猪免疫功能影响的细胞与分子机制[D];中国农业大学;2005年
2 贾杏林;猪附红细胞体分子诊断与致病机理的研究[D];中国农业大学;2005年
3 高庆华;精子流式分离和低剂量授精研究及XY精子差异表达基因筛选[D];西北农林科技大学;2009年
4 彭西;日粮硒对雏鸡免疫功能影响的机理研究[D];四川农业大学;2009年
5 张红;鸡B细胞cDNA T7噬菌体表达文库的构建及传染性法氏囊病毒B细胞受体的筛选、克隆与鉴定[D];河南农业大学;2007年
6 童一民;丙型肝炎病毒感染树鼩的实验研究[D];第二军医大学;2009年
7 刘翠艳;兽医中药免疫增强剂的筛选试验及其药理学研究[D];山东农业大学;2007年
8 孟春花;香猪卵巢细胞生物学特性和影响母猪卵巢颗粒细胞体外成熟的因素探讨[D];南京农业大学;2008年
9 郭东华;牛羊腐蹄病坏死梭杆菌白细胞毒素重组亚单位疫苗的研究[D];东北农业大学;2007年
10 孙延鸣;捻转血矛线虫半乳糖结合凝集素生物学功能研究[D];南京农业大学;2006年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 梁萍;马立克氏病疫苗一次和二次免疫的比较研究[D];扬州大学;2005年
2 杨庆丽;奶山羊乳房炎的淋巴细胞与乳腺上皮细胞凋亡规律[D];东北农业大学;2007年
3 杨丽丽;编码微球微流控芯片检测禽流感病毒方法的建立[D];吉林农业大学;2007年
4 武志红;人工感染绵羊肺腺瘤病毒内蒙株羔羊的临床病理学研究[D];内蒙古农业大学;2009年
5 刘志楠;Mel受体基因的克隆及原位杂交法检测其在鸡免疫器官中的表达规律[D];内蒙古农业大学;2007年
6 高明燕;H4亚型禽流感病毒血凝素单克隆抗体的制备及其初步应用[D];扬州大学;2007年
7 徐鹏;仔猪人工感染囊尾蚴后体液免疫和细胞免疫变化规律的研究[D];吉林农业大学;2006年
8 韩惠利;PCV2对体外培养的仔猪淋巴细胞凋亡及抗氧化能力的影响[D];南京农业大学;2006年
9 陈涛;高氟日粮对雏鸡免疫器官影响的研究[D];四川农业大学;2009年
10 尹兵;实时荧光PCR法检测饲料中反刍动物源性成分[D];大连理工大学;2007年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026