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水痘-带状疱疹病毒糖蛋白Ⅰ基因在昆虫细胞中的表达及纯化

郭立征  项金忠  卢晓燕  张鹏飞  章以浩  郭存三  
【摘要】:正 自的:从北京水痘-带状疱疹病毒(VZV)847株克隆糖蛋白I(gpI)基因,在杆状病毒昆虫细胞表达系统中表达,并对表达产物进行纯化。方法采用PCR方法从VZV DNA中扩增gpI全基因序列,并将其插入到杆状病毒转移质粒pBacPAK9中,获得重组转移质粒pBacVZVgpI,对pBacVZVgpI中的插入基因进行测序。重组转移质粒与线性杆状病毒BacPAK6DNA(Bsu36Idigested)共转染Sf9昆虫细胞获得重组病毒BacPgpI。通过亲和层析纯化重组蛋白,并检测其抗原性。结果PCR扩增得到gpI基因,测序结果表明克隆的外源基因正确。经SDSPAGE、免疫印迹(WesternBlot)试验表明gpI基因在昆虫细胞中获得了表达,表达产物在培养72小时达到高峰,重组蛋白的分子量约58KD和70KD,与理论值相符,蛋白质加工与天然蛋白类似。动物实验表明重组蛋白具有较好的免疫原性,可刺激小鼠产生中和抗体。SDSPAGE检测纯化的重组蛋白,纯度达80%。纯化蛋白经WesternBlot和ELISA实验,表明其具有特异的抗体结合活性。结论可以应用昆虫细胞表达水痘带状疱疹病毒gpI基因,为水痘带状疱疹病毒抗原定量分析、gpELISA的研制和制备亚单位疫苗提供了基础。

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