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《第一次全国中西医结合检验医学学术会议暨中国中西医结合学会检验医学专业委员会成立大会论文汇编》2014年
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胆管癌N糖标志物发现及其机制研究

周娉婷  房萌  高春芳  
【摘要】:目的:胆管癌(cholangiocarcinoma,CC)临床表现隐匿,早期易侵犯周围血管、神经、淋巴组织及邻近肝组织,手术难度大、预后较差。影像学检查是胆管癌诊断的重要手段,血清学标志物CA19-9是目前鉴别肝细胞癌和胆管癌的主要指标,但诊断灵敏度特异性仍有待提高。本研究从本科室特色N-糖组分析入手,评估N-糖链丰度及N-糖相关模型在胆管癌诊断中的价值和相关糖基转移酶的表达及调控机制方法:我们采用基于DNA测序仪的荧光糖电泳(DSA-FACE)技术,检测了249例研究对象(88例胆管癌、28例胆管囊肿、44例胆管结石及89例正常对照)的血清N-糖组图谱,比较胆管病变时其特征性改变,分析各峰值的差异。并用ROC曲线评估各指标的诊断效力。利用RT-PCR方法研究N-乙酰氨基葡萄糖基转移酶(N-acetylglucosaminyltransferases V,GNT-V)在胆管癌组织中的mRNA表达。用RNA干扰GNT-V的慢病毒载体转染胆管癌细胞系Hccc-9810,分别利用CCK-8法、细胞划痕、transwell法进行细胞增殖、迁移、侵袭实验。利用细胞周期检测试剂盒进行细胞周期实验。结果:N-糖图谱中发现胆管囊肿中12个N-糖链丰度与正常对照相比均无显著性差异。在胆管结石组中,前期研究发现的与炎症密切相关的peak1和peak2显著升高。胆管癌中,含有分支岩藻糖结构的peak9,peak10和peak12相比较其他3组均显著升高(P均小于0.001)。在临床资料完整的58例胆管癌患者中,8例发生肝侵犯、3例发生远端转移、31例有淋巴结转移。在淋巴结转移组中,peak9,peak10和peak12均比未发生转移组显著性升高(P均小于0.05)。ROC曲线分析发现,鉴别胆管癌与正常对照时,peak10单独诊断的曲线下面积(AUC)接近CA19-9(0.922vs 0.936),CA 19-9与peak10结合,构建联合诊断模型CA 19-9×p10,该指标的诊断效力比单独使用CA 19-9略有提高(0.943 vs 0.936);鉴别胆管癌与胆管囊肿时,CA19-9、peak10、CA19-9×p10的AUC分别为0.920、0.905和0.930;在鉴别胆管癌与胆管结石时,单独使用peak10的诊断效力略高于CA19-9,AUC分别为0.850、0.835,而两者联合参数CA19-9×p10的AUC显著提高,为0.871。RT-PCR结果表明,胆管癌组织与癌旁组织相比,糖基转移酶GNT-V升高。用RNA干扰GNT-V基因的慢病毒载体转染Hccc-9810细胞后,细胞的增殖、迁移、侵袭能力显著下降;细胞周期无明显影响。结论:N-糖标志物与现有实验室指标CA19-9联合诊断可显著提高胆管癌的诊断效力。GNT-V对于胆管癌细胞的增殖、迁移、侵袭的作用显著。

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