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《第二十一届全国中西医结合消化系统疾病学术会议暨国家级中西医结合消化系统疾病新进展学习班论文汇编》2009年
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中药丹参化学成分对TNF诱导的肝细胞凋亡和NF-B转位的影响

闫秀川  刘成海  
【摘要】:目的:丹参是抗肝纤维化有效中药复方扶正化瘀方的组成药味之一,现代研究表明,肝细胞凋亡是促进肝纤维化发生发展的重要机制之一。本研究拟以TNF诱导的肝细胞凋亡和NF-B转位作为筛选模型,观察丹参化学成分对其影响,为扶正化瘀方抗肝纤维化的有效物质基础研究提供部分依据。方法:低浓度(1μmol/L或0.2μg/ml)和中浓度(10μmol/L或2μg/ml)丹参化学成分(丹酚酸A,丹酚酸B,二氢丹参酮Ⅰ,丹参酮ⅡA,丹参酮Ⅰ,丹参素钠)与HL-7702细胞预孵育1h后,采用放线菌素D(Actinomysin D,Act D)和肿瘤坏死因子(Tumor necrosis factor TNF)作用.h诱导人肝细胞株HL-7702凋亡,TNF作用min诱导HL-7702细胞NF-B转位。应用Multiparameter Apoptosis 1和NF-B Actavation试剂盒染色后,药物高内涵筛选分析设备Kinetic Scan Reader获取荧光图像,配套软件分析结果。结果:药物高内涵筛选分析发现,Act D和TNF可诱导HL-7702细胞明显发生凋亡,表现为细胞核减小(核固缩),线粒体物质增加;1μmol/L和10μmol/L的丹酚酸A、丹酚酸B预处理均能明显防止肝细胞发生凋亡,表现为防止细胞核固缩和线粒体物质增加;其它成分无明显抗细胞凋亡作用(表1)。以丹酚酸B盐为示例,显示图像结果。正常对照细胞的NF-κB主要表达于细胞质;TNFα刺激后,NF-κB分布明显向细胞核内转移,表现为细胞核-细胞质荧光强度差值、比值明显增加;丹参各化学成分无抑制NF-κB核转位的作用,部分成分有增加NF-κB核转位的效应趋势(表2)。以丹酚酸B盐为示例,显示图像结果。结论:1μmol/L和10μmol/L的丹酚酸A、丹酚酸B预处理均能有效防止TNF诱导的肝细胞凋亡,其余成分(二氢丹参酮Ⅰ,丹参酮ⅡA,丹参酮Ⅰ,丹参素钠)无明显抗肝细胞凋亡作用。丹参各化学成分均无抑制TNF诱导的NF-κB核转位作用。

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