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蟾蜍灵增强全反式维甲酸对NB4细胞的诱导分化作用

朱志国  侯科佐  刘云鹏  
【摘要】:目的:研究蟾蜍灵与全反式维甲酸(ATRA)联合对急性早幼粒细胞白血病(APL)细胞株NB4 细胞的增殖抑制及诱导分化作用。方法:细胞增殖及凋亡检测:将NB4细胞浓度调整至5×105个/ml, 接种于24孔培养皿中,每孔1ml。实验分为对照组和蟾蜍灵组,后者分别加入20、40、60、80、100 nmol/L浓度的蟾蜍灵,不加药物同期培养细胞为对照组,每组设4个复孔。置培养箱内培养,作用1~ 72 h,显微镜下观察形态变化,采用锥虫蓝拒染法计算不同浓度下细胞生存率;诱导分化分别采用瑞氏-姬姆萨染色,在显微镜下观察的形态学变化、NBT还原试验计算NBT阳性细胞百分比、流式细胞仪测定细胞膜表面抗原CD11b的表达阳性率。结果:蟾蜍灵以时间、剂量依赖性抑制NB4细胞活力, 24小时,48小时,72小时抑制细胞增殖50%的药物浓度(IC50)分别为51nmol/L,35nmol/L,17 nmol/L。 20nM的蟾蜍灵作用于NB4细胞,分别在24、48小时观察到形态学上的细胞凋亡。蟾蜍灵低浓度1—10 nmol/L单独作用于NB4细胞,并不能诱导NB4细胞分化。而在5—10 nmol/L联合应用ATRA30 nmol/L 培养4—7天,能够明显增强ATRA对NB4细胞的诱导分化作用,联合应用较单用ATRA,细胞形态上出现胞质颗粒减少,染色质浓缩,核质比例减少,部分核仁消失,出现中、晚幼粒细胞及部分杆状核粒细胞,在功能上NBT还原率增加。ATRA30 nmol/L联合蟾蜍灵作用NB4细胞7天,NBT还原实验的阳性率随蟾蜍灵浓度增加而增高,ATRA30 nmol/L联合蟾蜍灵5nm01/L共同作用NB4细胞,细胞表面标记抗原CD11b也增加了22.4%,同时分化时间从7d缩短至4d,而且ATRA用量可减少至单用时的30%。结论:蟾蜍灵抑制NB4细胞活力及诱导细胞发生凋亡,蟾蜍灵与ATRA联合应用可显著增强ATRA对NB4 细胞的诱导分化作用。

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