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《2001’全国药用植物与中药院士论坛及学术研讨会论文集》2001年
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中国红豆杉紫杉烯合酶cDNA分离、表达和鉴定

王伟  石青  朱平  欧阳涛  李农  程克棣  
【摘要】:紫杉烯合酶是一种二萜环化酶,催化GGPP形成紫杉醇生物合成过程中的中间体紫杉烯。利用PCR扩增同源探针筛选cDNA文库克隆了一个编码中国红豆杉紫杉烯合酶3’-端的2151 bp cDNA片段,也通过PCR扩增得到了该基因5’-端的611 bp cDNA片段,将这两个cDNA片段拼接在一起,得到长2712 bp cDNA片段,具有一个2586个碱基的阅读框架(ORF),编码包括质体转移肽在内共862个氨基酸残基;该酶与太平洋红豆杉紫杉烯合酶有97%的同源性(identity),与其它植物萜类环化酶也有较高的同源性。利用融合表达载体pET-32a在大肠杆菌BL21trxB中表达,所表达的融合蛋白以包涵体形式存在。包涵体经过变性、复性和再折叠后,利用与His残基亲和的层析柱一步纯化得到融合的紫杉烯合酶。对酶促反应产物进行GC-MS分析,结果表明融合的紫杉烯合酶能催化产生4(5),11(12)-紫杉烯。

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