切花百合离体茎尖玻璃化法超低温保存研究

【摘要】：以切花百合西伯利亚试管苗离体茎尖为试材,通过正交设计试验对预培养基中蔗糖浓度、预培养时间和PVS2处理时间等影响超低温保存存活率的主要因素进行了分析,初步建立了切花百合种质玻璃化法超低温保存的技术方案:将继代培养45-60d的试管苗置于4℃低温锻炼一周以上,剥取茎尖1-2mm用0．3mol．L-1蔗糖液体预培养基培养2-3d后用MS+0．4mol．L-蔗糖 +2mol．L-1甘油混合溶液装载20min,0℃下用冰冻保护剂PVS2处理60-120min后迅速投入液氮中保存。40℃水浴中快速化冻2min,用MS+1．2mol．L-1蔗糖溶液洗涤10min,接种在MS+ 0．5mg．L-1 BA+0．1mg．L,-1 NAA+0．3mg．L-1 GA3+30g．L-1蔗糖+7g．L-1琼脂的再生培养基中常温下暗培2周,之后转移至正常光照下培养,存活率可达到50％以上。通过形态观察、可溶性蛋白和同工酶检测,冻存前后材料的遗传稳定性没有发生改变。