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白花败酱草的抗宫颈癌作用及其机制的研究

张涛  
【摘要】:目的败酱草属植物药中白花败酱草,黄花败酱草和异叶败酱三个物种的药理作用有很多报道,但有关白花败酱草抗宫颈癌的作用及机制的研究尚未见报道。本课题采用体外培养瘤细胞株和体内荷瘤动物模型的方法,探讨白花败酱草抗宫颈癌的作用与机制。方法本课题体内观察白花败酱草水提物和总皂苷对U14宫颈癌荷瘤鼠肿瘤的抑瘤率、对瘤组织肿瘤细胞周期的影响;HE染色观察总皂苷诱导肿瘤组织细胞分化的程度;免疫组织化学SP法检测白花败酱草总皂苷诱导肿瘤组织细胞PCNA(细胞增殖核抗原)、P53(突变型P53蛋白)和Bcl-2(B细胞淋巴瘤/白血病-2)蛋白的表达情况;放射免疫法(RIA)检测总皂苷对U14荷瘤鼠血清TNF-α(肿瘤坏死因子)和IL-2(白细胞介素-2)水平的影响;比色分析法检测总皂苷对荷瘤鼠血清T-AOC(总抗氧化能力)、SOD(超氧化物歧化酶)活性和MDA(丙二醛)含量的影响;考察白花败酱草水提物对U14荷瘤小鼠生存期的影响;体外观察白花败酱草水提物、醇提液、总皂苷、乙酸乙酯和正丁醇提取物对人宫颈癌Hela细胞生长增殖的抑制作用;光镜和透射电镜观察总皂苷和乙酸乙酯提取物诱导Hela细胞发生凋亡的情况;采用端粒重复序列扩增的方法利用银染技术(TRAP银染法)检测白花败酱草水提液、皂苷、乙酸乙酯和正丁醇提取物诱导Hela细胞端粒酶活性的改变,观察总皂苷、乙酸乙酯和正丁醇提取物对Hela细胞Caspase-3(半胱天冬酶)活性的影响;Western blot技术检测白花败酱草总皂苷、乙酸乙酯和正丁醇提取物诱导Hela细胞Bcl-2蛋白质的表达情况。结果白花败酱草在体内剂量依赖性地抑制U14宫颈癌细胞增殖,并延长U14荷瘤鼠的生存时间;白花败酱草可提高血清INF-α、IL-2水平,下调凋亡调控分子Bcl-2、p53和PCNA的表达,干扰肿瘤细胞的增殖周期,促进肿瘤细胞的凋亡。白花败酱草总皂苷在体外剂量依赖性地抑制Hela细胞的增殖,诱导Hela细胞的凋亡,抑制Bcl-2蛋白的表达,激活Caspars-3活性,抑制Hela细胞端粒酶活性。结论白花败酱草皂苷在体内通过下调Bcl-2、突变型p53和PCNA的表达,干扰肿瘤细胞的增殖周期,促进肿瘤细胞凋亡实现抑制U14宫颈癌细胞的增殖;在体外通过抑制Bcl-2的表达,激活Caspase-3活性,抑制端粒酶的活性;诱导Hela细胞的凋亡,达到抑制其增殖。

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