收藏本站
《第十二次全国医学遗传学学术会议论文汇编》2014年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

粘多糖贮积症Ⅱ型IDS基因新突变体外真核表达系统的建立

吴晓昀  郭奕斌  艾阳  蒋玮莹  黄永兰  赵小媛  李荣  
【摘要】:目的对一疑似MPSII型家系行IDS基因突变分析,以阐明患者发病的分子遗传学机制。对所发现的新突变,通过建立体外真核表达系统,以探讨其转录和表达的情况,从而在功能学方面对其致病性进行深入鉴定。方法首先采用尿GAGs定性检测对先证者进行快速初诊,然后依次对其IDS基因突变热区和其他外显子进行直接测序。在发现新突变后,RT-PCR扩增正常野生型及患者突变型IDS基因cDNA全长序列,克隆至pcDNA3.1(+)表达载体,分别构建IDS-pcDNA3.1,IDS-p.L381P-pcDNA3.1重组质粒。以IDS-pcDNA3.1为正常对照,空质粒pcDNA3.1为基础对照,IDS-p.L381P-pc DNA3.1为实验组,分别用脂质体2000瞬时转染293T细胞,建立体外真核表达系统。转染后3天收取细胞胞体,胞体用超声破碎并用BCA蛋白定量。然后用荧光分析法检测各组细胞中艾杜糖-2-硫酸酯酶活性。结果1、先证者尿检呈阳性(+)。2、在其IDS基因编码区内检出c.1142 TC错义突变,其母为该位点的杂合突变。3、检索HGMD数据库和NCBI dbSNP数据库均未发现该变异位点,说明是一新突变并且不是SNP位点。4、IDS基因cDNA全长野生型及突变型序列克隆至载体,经测序验证无误。5、胞体IDS酶活性(取3次重复实验平均值,单位:nmol/4h/m1):IDS-pcDNA3.1转染表达为315.26,pcDNA3.1空质粒为18.1,IDS-p.L381P-pcDNA3.1为15.91。提示该突变造成转染细胞IDS酶活性显著降低,其值甚至低于基础对照。结论IDS基因c.1142TC错义突变为一新的病理性突变。此突变是该MPSII型患儿发病的根本原因。

手机知网App
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 刘洪,周明君,杨大权;论网络安全的IDS技术[J];沈阳医学院学报;2002年04期
2 高美华,王秋波,任书荣,张艳丽,王静,张丽;突变人CD59基因真核表达系统的构建[J];中国免疫学杂志;2005年05期
3 李贤慧,王桂云,王育强,郭新民;β-NGF在真核细胞蛋白表达系统中的表达及活性鉴定[J];牡丹江医学院学报;2002年01期
4 高云;真核表达系统的研究进展[J];中华男科学;2002年04期
5 孙爱华,邵浙新,阮萍,毛亚飞,严杰;葡萄球菌肠毒素A基因真核表达系统的构建及其目的重组蛋白的鉴定(英文)[J];中国人兽共患病杂志;2004年04期
6 安乃莉!100052北京,徐春晓!100052北京,姚立红!100052北京,陈爱君!100052北京,曾革非!100052北京,张立国!100052北京,张智清!100052北京;TNF受体(P55)和IgGFc的融合蛋白在哺乳动物细胞中的表达[J];中华实验和临床病毒学杂志;2001年02期
7 许丹;郑瑾;孙丽娜;耿宜萍;李旭;王一理;;HIV-1病毒样颗粒真核表达系统的建立[J];西北大学学报(自然科学版);2008年01期
8 孙樱林;黄薇;刘国庆;冯海兰;;通过真核细胞表达系统获得重组人釉原蛋白[J];中华口腔医学研究杂志(电子版);2008年02期
9 田野,钟照华,赵铁强,黄建林,安毅,唐伟,沈景霞,钟学宽,孟繁超,黄永麟,鲁凤民,叶鸿瑁;柯萨奇病毒B组3型中国分离株VP1基因真核表达系统的克隆[J];中国地方病学杂志;1999年03期
10 李忠玉;吴移谋;黄秋林;周洲;;沙眼衣原体pORF5蛋白真核表达系统的构建与鉴定[J];南华大学学报(医学版);2010年01期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 马兴元;;基因工程真核表达系统的一颗明星[A];新世纪 新机遇 新挑战——知识创新和高新技术产业发展(下册)[C];2001年
2 敖腾河;庞滨;谢辉;;数据库触发器机制在IDS系统中的应用[A];第二十四届中国数据库学术会议论文集(技术报告篇)[C];2007年
3 张利宁;万兵;孙汶生;曹英林;马春红;宋静;;人4-1BB(CD137)在真核细胞CHO中的高效表达及活性研究[A];山东免疫学会、山东微生物学会医学微生物学专业委员会、山东省医学会微生物学和免疫学专业委员会、山东省医药生物技术学会2001年学术年会论文汇编[C];2001年
4 陈莹;叶曼;陈剑清;张耀洲;吕正兵;;利用Bac-to-Bac系统筛选Bm-Bac-S8重组病毒[A];华东六省一市生物化学与分子生物学会2009年学术交流会论文摘要汇编[C];2009年
5 王培宁;吴书林;李晓红;张旭超;林秋雄;单志新;邓春玉;肖定璋;侯跃双;余细勇;;致心律失常性右心室心肌病患者Plakophilin-2基因突变对连接蛋白43的影响[A];中华医学会第11次心血管病学术会议论文摘要集[C];2009年
6 李永红;居军;丁进芳;;肺癌线粒体HV1基因突变的初步研究[A];第九届西北五省(区)检验医学学术会议论文汇编[C];2005年
7 邹积艳;朱平;;急性髓细胞白血病NPM1基因突变的检测方法及临床特征[A];第12届全国实验血液学会议论文摘要[C];2009年
8 尹瑞川;汪海林;;丙烯醛-DNA加合物的鉴定与分析[A];中国化学会第27届学术年会第02分会场摘要集[C];2010年
9 郑巧娟;李振新;刘含秋;吴志英;;CADASIL患者NOTCH3基因突变特征及其临床特点分析[A];中华医学会第十三次全国神经病学学术会议论文汇编[C];2010年
10 邓启文;;大肠杆菌耐喹诺酮类药物GyraseA基因突变的研究[A];中华医学会第七次全国感染病学术会议论文汇编[C];2001年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 本报记者 胡英;IDS争议下发展[N];计算机世界;2002年
2 记者 裴闯 陈斌华;猝死多为基因突变所致,遗传概率高达50%[N];新华每日电讯;2004年
3 ;NOTCH1基因突变可引发白血病[N];医药经济报;2004年
4 本报记者 童光来;基因突变易致二成国人患骨刺[N];北京科技报;2004年
5 星辰 编译;百岁老人基因突变相同[N];大众科技报;2003年
6 本报记者 程聪;这边风景独好[N];中国计算机报;2002年
7 记者 崔志坚;河南发现一罕见念珠状毛发家族[N];光明日报;2006年
8 明月;多细胞与基因突变有关[N];中国医药报;2000年
9 黄守勤;福建发现难治性高血压家族[N];健康报;2007年
10 通讯员 冯瑶 记者 佳学;基因突变与乳腺癌发病密切相关[N];江苏科技报;2007年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 胡子有;阿片受体真核表达系统的构建与表达及μ和δ受体的相互作用研究[D];南方医科大学;2010年
2 朱新红;CD59基因W40位点突变、真核表达与生物学活性研究[D];青岛大学;2008年
3 王明臣;前列腺癌DNA聚合酶β基因突变、表达及其调控研究[D];郑州大学;2006年
4 李宗平;细胞凋亡及β-catenin基因在颅咽管瘤发病及预后中的意义探讨[D];四川大学;2006年
5 张何;一维微流控微珠阵列芯片用于基因突变分析的研究[D];湖南大学;2008年
6 李兵;家蚕和野桑蚕对有机磷农药抗性的研究[D];苏州大学;2009年
7 茅江峰;不同基因突变对特发性低促性腺激素性性腺功能减退症患者的临床特点、隐睾和生精疗效的影响[D];北京协和医学院;2013年
8 雷杰;白斑综合征病毒重组蛋白对克氏原螯虾免疫效果的研究[D];浙江大学;2006年
9 刘凤霞;MED,PSACH两家系致病基因的筛选及基因突变的分析研究[D];中国协和医科大学;2010年
10 林江;应用高分辨熔解曲线系统检测髓系肿瘤中基因突变及其临床意义[D];江苏大学;2012年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 吴宁;CD59基因突变与糖尿病血管病变的相关性研究[D];青岛大学;2005年
2 张树超;CD59基因突变与细胞凋亡信号转导的相关性研究[D];青岛大学;2006年
3 金园园;鸡MHCⅠα基因真核表达系统的建立与鉴定[D];安徽农业大学;2012年
4 穆浩然;分布式IDS中管理平台的研究与设计[D];华南理工大学;2012年
5 苏华安;基于攻击图的IDS警报关联预测技术研究[D];国防科学技术大学;2010年
6 卢颖虎;阳离子抗菌肽G13的原核表达和真核表达系统的构建[D];安徽大学;2012年
7 陈亮;防火墙与IDS在校园网中结合部署的研究与应用[D];安徽大学;2010年
8 葛拉迪;入侵检测系统(IDS):拒绝服务攻击的信息和分析[D];华中科技大学;2010年
9 王岱松;基于多核的IDS测试工具基本框架的设计与实现[D];西安电子科技大学;2012年
10 巩书丽;IDS中高效字符串匹配算法的研究与应用[D];东北大学;2010年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026