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《中国遗传学会第九次全国会员代表大会暨学术研讨会论文摘要汇编(2009-2013)》2013年
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高产铁载体假单胞菌HYS铁载体相关基因的研究

于鑫焱  陈敏  谢志雄  
【摘要】:铁对于几乎所有生物体都是必需的微量元素,但是由于其在有氧条件下低的溶解度,使得环境中可利用的铁远远低于微生物的需求量。细菌通过分泌铁载体来解决这一问题。铁载体是由细菌、真菌分泌的一类低分子量铁的螯合物,可与环境中微量的游离铁离子结合,通过膜上特异性受体,将铁离子运输到胞内,满足生物体对铁的正常需求。假单胞菌HYS是由本实验室从东湖水域中筛选得到的一株高产铁载体菌株。其产铁载体能力约为其他假单胞菌(如:P.flurescens CHA0,P.putida ATCC 12633,P.aeruginosa PAO1)的五倍左右。是很好的研究铁载体合成调控机制的实验材料。由于假单胞菌种属特异性及铁载体本身的多样性和复杂性,本实验室用转座子质粒pBT20对HYS进行转座插入突变,筛选铁载体合成发生改变的突变株。我们共筛选了19,635株突变株,得到40株在CAS检测平板上生长正常但是铁载体产量有变化的突变株。其中34株产量明显减少,1株产量稍有增加,还有5株开始产量低于野生型,后与野生型相当。通过Tail-PCR,半随机PCR,转座子挽救相结合,得到了所有转座突变株插入位点处的基因,共24个。其中双组分调控系统GacS/GacA插入突变株产:铁载体能力明显下降,对这两个基因进行定点敲除,根据在CAS检测平板上的螯合圈大小,敲除株产铁载体能力均比野生型低很多,约为野生型的1/36,回补菌株又可以同复到野生型的水平,说明GacS/GacA双组分调控系统在HYS产铁载体过程中有着重要的正调控作用。
【作者单位】:武汉大学生命科学学院
【分类号】:Q933

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