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《中国的遗传学研究——遗传学进步推动中国西部经济与社会发展——2011年中国遗传学会大会论文摘要汇编》2011年
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DJ-1~(M261)基因在NIH3T3细胞中凋亡的研究

张梅英  徐影琪  王惟  赵越  于萌  杨葳  
【摘要】:目的构建pcDNA3.1/myc-His-DJ-1和pcDNA3.1/myc-His-DJ-1M~(261)重组表达载体,为研究DJ-1M~(261)基因与细胞凋亡的关系及建立转基因动物模型奠定基础。方法采用突变试剂盒将第26位氨基酸进行突变,分别构建pcDNA3.1/myc-His-DJ-1和pcDNA3.1/myc-His-DJ-1M~(261)重组表达载体,采用脂质体转染的方法分别将pcDNA3.1/myc-His-DJ-1和pcDNA3.1/myc-His-DJ-1M~(261)质粒转染NIH3T3细胞并用G418压力筛选稳定克隆,对获得的2种转染细胞在DNA水平、转录水平和蛋白质水平进行鉴定,采用MTT染色方法和AnnexinV-FITC试剂盒检测转染阳性克隆细胞的细胞活力与细胞凋亡。结果 pcDNA3.1/myc-His-DJ-1和pcDNA3.1/myc-His-DJ-1M~(261)重组质粒转染NIH3T3细胞经G418筛选后,PCR方法检测分别获得1个和3个阳性细胞克隆,RT-PCR及western blot方法进行DJ-1-His基因表达检测,结果均证明外源插入基因的表达,MTT实验结果初步证明转染DJ-1M~(261)基因的NIH3T3阳性细胞组增殖速率低于正常NIH3T3细胞组,转染DJ-1基因的NIH3T3阳性细胞细胞增殖速率与正常NIH3T3细胞相比无明显差别;细胞凋亡检测实验结果表明转染DJ-1M~(261)基因的阳性克隆细胞凋亡率高于正常NIH3T3细胞,转染DJ-1基因的NIH3T3阳性细胞细胞凋亡率低于正常NIH3T3细胞。结论成功构建pcDNA3.1/myc-His-DJ-1和pcDNA3.1/myc-His-DJ-1M~(261)重组表达质载体,DJ-1M~(261)基因突变更易导致NIH3T3细胞的凋亡。
【作者单位】:中国医科大学实验动物部
【分类号】:Q255

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