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《中国的遗传学研究——遗传学进步推动中国西部经济与社会发展——2011年中国遗传学会大会论文摘要汇编》2011年
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Smac/Diablo~(S41L)转基因小鼠的建立与鉴定

卢宇  于梅  程静  李洪波  李征月  刘庄  高建刚  袁慧军  
【摘要】:SMAC/DIABLO是本课题组在一个常染色体显性遗传非综合征型耳聋家系(DFNA64)位的新的耳聋基因,通过定位区域已知基因直接测序找到与耳聋表型共分离的SMAC/DIA基因c.377CT杂合突变。SMAC/DIABLO是线粒体内膜上非常重要的细胞促凋亡蛋白,本组研究提示p.S71L突变体可引发线粒体膜电位慢性损伤。进一步的研究需要在动物模型中人类的临床表现,进而验证和分析突变型SMAC/DIABLO对内耳毛细胞的损伤作用,从而揭病基因突变导致耳聋的机理、机制,为预防和治疗的可能性打下基础。本研究利用哺乳动效表达载体pcDNA3.1(+)构建包含CMV启动子、人工构建内含子、目的基因cDNA编码序多聚腺苷酸信号等元件的转基因载体,通过原核DNA显微注射转基因技术将构建的外源转载体DNA片段注射到CD1远交系小鼠合子的前核中,分别建立并得到了整合有突变型和野Smac/Diablo基因序列的DFNA64转基因小鼠模型;利用PCR鉴定小鼠的基因型;real-time检测Smac/Diablo基因在神经系统组织中的表达量,证实Smac/Diablo基因的DFNA64转基因体内的过量表达。突变型转基因小鼠、野生型转基因小鼠和野生型小鼠三组各6只,分别干诱发电位(ABR)检测,刺激声用tone burst(4-32kHz)。结果 Smac/Diablo野生型和突变基因小鼠与正常对照野生型小鼠在3周、5周、7周、8周、9周ABR各频率平均听阈无显著异。结论 :野生型和突变型Smac/Diablo基因的过量表达对在CD1品系小鼠听力无显著改变。

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