癌基因EIF5A2转录调节的功能研究

【摘要】：【目的】真核细胞翻译起始因子5A2(eukaryotic translation initiation factor 5A2,EIF5A2)基因是近年来新发现的一个癌基因,它定位于人类染色体3q26.2,该区域的扩增常见于多种恶性肿瘤中。本研究的目的在于分析人EIF5A2基因启动子区的结构及与其作用的反式作用因子,为进一步研究该基因的表达调控机制奠定基础。【方法】本研究首先选取该基因自转录起始位点上游2000 bp基因组DNA序列作为研究对象,分别构建四种不同长度截短片段的重组质粒,利用pGL3报告基因系统分析各截短片段的活性,最终确定EIF5A2基因核心启动区。进一步应用定点突变、凝胶阻滞(EMSA)和染色质共沉淀(ChIP)技术对核心启动区内的潜在的转录因子结合元件进行确认。此外,使用实时定量PCR方法对EIF5A2基因与目的转录因子在卵巢癌组织中的表达情况进行了检测,并对二者在卵巢癌中转录水平的相关性进行了分析。【结果】研究表明,EIF5A2基因启动子核心启动区位于-106bp～+13bp范围。该区域存在四个Sp1转录因子结合位点,研究发现四个位点对EIF5A2基因启动子活性均具有重要调节作用。在Sp1高表达卵巢癌细胞系UACC-1598中,使用Sp1转录因子结合位点特异的抑制剂可以使EIF5A2蛋白的表达水平下降,此过程呈现剂量依赖性。此外,在卵巢癌组织样本中,EIF5A2基因与Sp1基因二者在转录水平p值在以0.01为阈值的水平下是显著的,即二者存在显著相关。【结论】EIF5A2基因启动子核心启动区位于-106bp～+13bp范围。该区域包含的四个Sp1转录因子结合位点,对EIF5A2基因启动子具有明显的正调节作用。同时,EIF5A2基因与Sp1基因在卵巢癌组织中的转录水平呈现显著正相关(P0.01)。