收藏本站
收藏 | 论文排版

海洋细菌Flammeovirga yaeyamensis MY04分泌型多糖降解酶的基因克隆与序列分析

韩文君  古静燕  李俊刚  顾谦群  吴志红  李越中  
【摘要】:F.yaeyamensis MY04能分泌十余种多糖降解酶,包括耐热、耐碱的琼胶酶系。为发掘该菌株丰富的多糖降解酶基因资源,用pCC1FOS构建了基因组DNA文库,包装滴度是5×10~5CFU/ml,平均插入片段长度大于30kb,总容量超过15Gbp。结合化学染色法,用含多糖底物的多种平板进行了文库的筛选,但未获阳性克隆。对120个随机克隆进行了末端测序,结果得到13个碳水化合物降解酶的基因序列标签;据此进行文库的PCR筛选,得到含分泌型多糖降解酶基因的6个重叠克隆;进行步移测序或鸟枪法测序,共得到包括2个β-琼胶酶、4个甘露聚糖酶、1个纤维二糖水解酶,1个果胶裂解酶、1个海藻糖水解酶和3个底物未知的多糖降解酶在内的12个分泌型多糖降解酶的基因。这12条酶的序列中含有Ⅰ型或Ⅱ型信号肽序列、与已鉴定功能的酶相似性普遍低于50%、且模块结构及其组成较新颖。其中,琼胶酶AgaG4含新型模块组成(GH16/ChtBD3)、AgaB8模块结构未知。研究还发现,用于鸟枪法测序的克隆R012和R093含其中8条基因,这些基因或所在操纵子的上游调控区缺少-10、-35、RBS等常见的启动子基序,可能是导致底物诱导表达法筛选文库失败的首要原因。本文首次报道Flammeovirga属细菌的多糖降解酶及其基因的序列特征,与已知物种的差异较为显著。

知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前8条
1 徐芳芳;;探寻海世界 开拓新津途[J];科学中国人;2010年05期
2 周海斌;赵虎;高向东;;多糖酶法修饰研究的新进展[J];药学进展;2007年08期
3 金昌海;索标;阚娟;王红梅;汪志君;;桃果实采后贮藏过程中细胞壁多糖的变化(英文)[J];植物生理与分子生物学学报;2006年06期
4 祁凤华;徐春生;王新峰;李海英;潘晓亮;向春和;高巍;;多糖降解酶对苜蓿干草营养物质瘤胃降解率的影响[J];石河子大学学报(自然科学版);2005年05期
5 牟海津,江晓路,刘志鸿;利用微生物开发海洋多糖降解酶的研究[J];海洋科学;2003年11期
6 黄民权;略谈真菌和植物之间的相互关系[J];植物杂志;1999年06期
7 朱国辉!漳州,363000;多糖降解酶在黄麻前处理工艺中的应用研究[J];漳州师范学院学报(自然科学版);1995年02期
8 曲立民;;二种新的酿造用酶:脱支酶和葡聚糖酶[J];微生物学杂志;1987年02期
中国重要会议论文全文数据库 前3条
1 韩文君;古静燕;闫秋洁;李俊刚;顾谦群;李越中;吴志红;;海洋细菌Flammeovirga yaeyamensis MY04对多糖的降解利用及胞外琼胶酶系的研究[A];2010年第四届全国微生物遗传学学术研讨会论文摘要集[C];2010年
2 韩文君;古静燕;李俊刚;顾谦群;吴志红;李越中;;海洋细菌Flammeovirga yaeyamensis MY04分泌型多糖降解酶的基因克隆与序列分析[A];2010年第四届全国微生物遗传学学术研讨会论文摘要集[C];2010年
3 汪勇;李富伟;汤海鸥;;非淀粉多糖酶制剂的应用研究进展[A];2008山东饲料科学技术交流大会论文集[C];2008年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978