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DJ-1L166P转基因小鼠模型的建立

张梅英  吴红联  蔺美娜  李兆阳  杨葳  董婉维  周生来  于洋  王惟  吕相川  秦英  郑志红  王禄增  
【摘要】:目的探讨DJ-1 L166P突变基因在帕金森病发生中的作用。方法利用TRLzol试剂一步法提取SH-SY5Y细胞的总RNA,采用RT-PCR试剂盒反转录获得细胞的cDNA,特异引物扩增DJ-1片段,将氨基酸编码166位亮氨酸突变为脯氨酸,构建pcDNA3.1-myc-his-DJ-1L166P真核表达载体,利用显微注射的方法将DJ-1 L166P基因片段(约3.9kb)导入BDF1受精卵雄原核中并移植到同期受孕的假孕母鼠输卵管中,对产出仔鼠的鼠尾组织DNA进行PCR、southern检测,对southern鉴定阳性的转基因小鼠进行RT-PCR、western表达检测。结果共产生20只子代小鼠,经PCR和southern鉴定结果表明1号和7号为转基因阳性小鼠,两只转基因小鼠RT-PCR检测结果显示:1号小鼠RT-PCR检测大脑、小脑、肝、肺、肾、睾丸有不同程度的表达并高于正常C57BL/6小鼠,7号小鼠RT-PCR检测只有肝、肺组织表达亦高于正常C57BL/6小鼠,实验结果统计学分析1号转基因小鼠的大脑与正常C57BL/6小鼠比较具有显著性差异(P0.05),western检测结果表明1号小鼠大脑有His标签的表达。结论成功获得1只DJ-1 L166P基因突变转基因小鼠,为课题的下一步实验研究打下良好的基础。

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