收藏本站
《第八次全国医学遗传学学术会议(中华医学会2009年医学遗传学年会)论文摘要汇编》2009年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

HBG1和TFRC基因的克隆与原核表达

袁媛  周新  
【摘要】:目的采用特异性单克隆抗体对胎儿细胞进行标记,并结合流式细胞仪进行高效富集分选的技术,是分离、纯化孕妇外周血中胎儿细胞的最佳手段。但因目前尚未发现识别胎儿细胞的特异性抗体,故不同学者选用的标记性抗体也有所不同。胎儿血红蛋白(fetal hemoglobin,HbF)与转铁蛋白受体(transferring receptor,TFRC)单克隆抗体联合应用,能大大提高分离胎儿有核红细胞的准确率。原核表达胎儿特异性血红蛋白γ链(hemoglobin gamma A,HBG1)与TFRC,为制备特异性单克隆抗体标记做基础,以期应用于胎儿有核红细胞标记。方法依据GeneBank中NM_000559 HBG1序列和NM_003234 TFRC序列亲水区,分别用TRIZOL提取人胎盘组织及肝细胞癌细胞Hep3B中的总RNA,经RT-PCR从人胎盘组织cDNA中扩增出HBG1,并采用HindⅢ和XhoⅠ酶切位点,引物序列:HBG1-F 5'-CAGAAGCTTGTATGGGTCATTTCACAGAGGA-3';HBG1-R:5'- ATACTCGAGTCAGTGGTATCTGGAGGACAGG-3';同时,从Hep3 B细胞cDNA中扩增TFRC,设计带有BamHⅠ和XhoⅠ酶切位点的引物,序列为:TFRC-F:5'-AATGGATCCGGCGATAACAGTCATGTGGA-3',TFRC-R:5'-GGACTCGAGT TTAGTACCAAAATTAGCATG -3'。将HBG1及TFRC的PCR产物凝胶回收后,连接至双酶切后的Pet28a质粒,转化至感受态BL21,筛选经测序验证的阳性克隆后,IPTG诱导HBG1与TFRC基因的表达。结果测序显示带有HBG1基因的Pet28a质粒与带有TFRC基因的Pet28a质粒构建成功,经表达产物的聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测,IPTG诱导表达出分子量分别大约在19kDa和21kDa的HBG1蛋白及TFRC亲水区蛋白。结论HBG1蛋白和TFRC亲水区蛋白原核表达成功,可用于进一步的表达纯化及单克隆抗体的制备。
【作者单位】:武汉大学中南医院基因诊断中心
【分类号】:R341

手机知网App
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 孙雪松;何庆瑜;;含铁蛋白介导的铁转运分子机制[J];化学进展;2007年12期
2 张宏伟,刘俊涛,王晓航;转铁蛋白和转铁蛋白受体的研究进展[J];国外医学.临床生物化学与检验学分册;2000年04期
3 肖代雯;朱慧芬;沈昕;邢薇;黄宇;雷萍;黄韬;王国斌;沈关心;;抗转铁蛋白受体双价抗体的构建、表达及鉴定[J];中国免疫学杂志;2008年01期
4 李强,李丰益,廖清奎,罗春华,杨崇礼;人胎盘微绒毛膜的制备及其转铁蛋白受体研究[J];四川大学学报(医学版);1992年03期
5 胡兵,田聆,卢铀,杨莉,赵霞,刘继彦,魏于全;鼠表皮生长因子受体胞外段原核表达、纯化与复性[J];生物医学工程学杂志;2003年02期
6 齐建国,周为民,谷淑燕;EB病毒早期蛋白P54的原核表达及其免疫原性的研究[J];生物技术通讯;2003年05期
7 沈飞;董宁征;范磊;赵益明;谢丽倩;阮长耿;;人血管性血友病因子A1区单克隆抗体的研制[J];中国血液流变学杂志;2008年01期
8 胡以平,姚玉成;TNF家族的新成员TRAIL cDNA的克隆及其在E.coli中的表达[J];癌变畸变突变;2000年02期
9 刘智敏,陈俊杰,林佳,王若菡,游乐然,东云华;hBDNF基因原核表达重组质粒的构建及其在大肠杆菌中的表达[J];生物医学工程学杂志;2001年01期
10 胡兵,田聆,刘健,卢铀,赵霞,魏于全;人EGFR胞外段原核表达及免疫原性研究[J];华西医学;2003年01期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 袁媛;周新;;HBG1和TFRC基因的克隆与原核表达[A];第八次全国医学遗传学学术会议(中华医学会2009年医学遗传学年会)论文摘要汇编[C];2009年
2 王小中;熊火梅;黄波;;NGAL原核表达及多克隆抗体的制备[A];中华医学会第九次全国检验医学学术会议暨中国医院协会临床检验管理专业委员会第六届全国临床检验实验室管理学术会议论文汇编[C];2011年
3 段勇;向莉;王玉明;;铜绿假单胞菌外膜蛋白OprM原核表达及抗体制备[A];中华医学会第九次全国检验医学学术会议暨中国医院协会临床检验管理专业委员会第六届全国临床检验实验室管理学术会议论文汇编[C];2011年
4 尤强;程琳玲;王颖;王树军;张惠珍;葛海良;周光炎;;CML66基因的克隆、原核表达及多克隆抗体的制备[A];中国免疫学会第四届学术大会会议议程及论文摘要集[C];2002年
5 杜武英;戴佳琳;黄江;胡旭初;徐劲;余新炳;吴璇;;亚洲牛带绦虫稀醇酶基因的原核表达及组织定位研究[A];全国寄生虫学与热带医学学术研讨会论文集[C];2008年
6 高玉录;;潘顿-瓦伦丁杀白细胞毒素(PVL)lukF-PV基因的克隆及原核表达[A];中华医学会第八次全国检验医学学术会议暨中华医学会检验分会成立30周年庆典大会资料汇编[C];2009年
7 张强;高正琴;周育森;贺争鸣;吴昊;;SARS病毒核蛋白的原核表达及间接ELISA的初步建立[A];全国人畜共患病学术研讨会论文集[C];2006年
8 袁仕善;吴少庭;秦莉;张仁利;高世同;黄达娜;余新炳;;SARS冠状病毒N蛋白的表达及其诱导的免疫应答[A];全国人畜共患病学术研讨会论文集[C];2006年
9 孙萍;杨军;李保昌;王全立;;单纯疱疹病毒特异性糖蛋白抗原的原核表达及纯化[A];第6次全国微生物学与免疫学大会论文摘要汇编[C];2004年
10 任瑞文;唐博恒;方美玉;刘建伟;白志军;;主要黄病毒E蛋白抗原表位分析与初步鉴定[A];新发和再发传染病防治热点研讨会论文集[C];2009年
中国重要报纸全文数据库 前2条
1 俞忠良;我国克隆出SARS病毒样颗粒[N];健康报;2003年
2 本版编辑编译;青蒿素与癌症治疗[N];医药经济报;2002年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 赵梓纲;白念珠菌磷脂酶B的原核表达、纯化及功能验证[D];中国人民解放军军医进修学院;2011年
2 周艳春;人CD7 cDNA的克隆、表达及功能研究[D];第三军医大学;2001年
3 孙长凯;人NMDA受体主亚基M3M4环靶片段自身免疫抗兴奋毒性神经保护研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2003年
4 张辉;单增李斯特菌ActA的表达、免疫原性及胶体金试纸研制[D];吉林大学;2008年
5 郑山根;LPS多表位模拟肽及抗原性的研究[D];中国人民解放军第一军医大学;2003年
6 张巧玉;鼠精子抗原Sp17与IL-5融合蛋白的克隆表达及其免疫性避孕效研究[D];第三军医大学;2004年
7 王淑豪;人肝脯氨肽酶基因的克隆表达及其生化药理学性质[D];中国人民解放军军事医学科学院;2003年
8 王瑞琳;SARS冠状病毒分离鉴定、疫苗构建及免疫血清制备研究[D];吉林大学;2006年
9 杨应华;人源多肽抗生素LL-37/hCAP-18的初步研究[D];中国协和医科大学;2003年
10 冯永嘉;空肠弯曲菌粘附蛋白基因工程疫苗的实验研究[D];重庆医科大学;2003年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 陈雄艳;人IL-24基因的克隆、表达及活性鉴定[D];苏州大学;2004年
2 刘志强;抗Cyclin D1人源胞内单链抗体的原核表达与鉴定[D];吉林大学;2011年
3 张淑华;心肌型脂肪酸结合蛋白的原核表达与应用研究[D];吉林大学;2006年
4 欧阳锦凤;人博卡病毒结构蛋白VP1u,非结构蛋白ORFx和NP1的原核表达与抗体制备[D];华中师范大学;2011年
5 徐波;大鼠血红素氧化酶1基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达[D];吉林大学;2006年
6 王健;HLA-A33分子的体外表达及鉴定[D];山东农业大学;2011年
7 林珊珊;一、幽门螺杆菌napA基因的原核表达及初步分析  二、幽门螺杆菌vacA毒性片段与cagA融合基因的原核表达[D];重庆医科大学;2004年
8 张玉梅;人NMDA受体主亚基M3-M4环的原核表达、纯化与鉴定[D];大连医科大学;2003年
9 侯毅鞠;凋亡抑制因子Svv基因的构建及其原核表达[D];第四军医大学;2004年
10 黄世腾;幽门螺杆菌cag致病岛中cagL基因的鉴定与分析[D];江苏大学;2010年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026