不同荧光片段BiFC效应的比较研究

【摘要】：双荧光分子互补(Bimolecudar Fluorescence Complementetion,BiFC)是活细胞内研究蛋白质-蛋白质相互作用的有力工具。该技术利用荧光蛋白的两个片段分别融合相互作用的蛋白对,当蛋白因相互作用而靠近,将原本不能激发荧光的两个荧光片断拉近从而形成完整的荧光蛋白分子而能激发荧光。BiFC的方法可以实现细胞内蛋白相互作用的可视化,已经被广泛应用于相互作用蛋白的亚细胞定位。在BiFC体系中,不同的GFP的突变体在不同的位点裂开后,形成BiFC效应,生成荧光的强度、荧光蛋白成熟的时间各不相同,不同的片段组合后荧光蛋白成熟的最佳温度也不尽相同。我们对GFP、Venus的155、158、173等位点分开后的荧光蛋白片段分别与Fos或Jun构建BiFC载体,各种组合分别在Hela细胞中表达后,对其荧光强度等参数进行了比较。结果表明, VenusN173/VenusC155组合的灵敏度最高、转染后37℃培养16小时即可成熟激发荧光;GFPN158/GFPC159需要30℃培养24小时以上才可激发荧光;同样的质粒转染量,VenusN173/VenusC155组合的阳性细胞数目高于GFPN158/GFPC159。该研究有助于针对不同的实验目的选择不同的BiFC体系。