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板栗疫病菌高效同源重组系统的构建

蓝秀万  姚姿婷  陈保善  
【摘要】:低毒病毒/板栗疫病菌系统是一个具有独特优点的、崭新的研究病毒与宿主相互作用的模型系统。以同源重组为基础的遗传操作技术是该系统中研究低毒病毒的宿主因子基因与靶基因的重要手段。为了构建一个高效的基于同源重组的板栗疫病菌遗传操作系统,本研究以粗脉孢菌中编码在非同源重组途径中起关键作用蛋白的基因mus-52与本实验室构建的板栗疫病菌EST数据库中EST序列比对获得cpku80 EST序列,在此基础上获得了含cpku80基因全长的基因组DNA 片段。根据亚克隆测序分析结果,构建了在苯菌灵抗性基因的两侧含cpku80基因旁侧序列的同源双交换片段,应用该片段转化EP155,筛选到一个板栗疫病菌 cpku80基因缺失突变株(cpku80△)。构建在G418抗性基因的两侧含CPKu80 基因旁侧序列的同源双交换片段用于检测cpku80基因缺失突变株同源重组效率,三次独立的实验结果表明同源重组率均高于80%。高效同源重组系统的构建为利用低毒病毒/板栗疫病菌系统深入研究病毒与宿主相互作用机制奠定了良好的基础。

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